中国骨质疏松杂志
中國骨質疏鬆雜誌
중국골질소송잡지
CHINESE JOURNAL OF OSTEOPOROSIS
2012年
4期
295-299
,共5页
李俊青%江建明%冯瑞强%蒋晖%闫文娟%杨德鸿
李俊青%江建明%馮瑞彊%蔣暉%閆文娟%楊德鴻
리준청%강건명%풍서강%장휘%염문연%양덕홍
甲状旁腺素%荧光共振能量转移%PKC激活报告分子%PKC-delta激活报告分子%甲状旁腺素1型受体
甲狀徬腺素%熒光共振能量轉移%PKC激活報告分子%PKC-delta激活報告分子%甲狀徬腺素1型受體
갑상방선소%형광공진능량전이%PKC격활보고분자%PKC-delta격활보고분자%갑상방선소1형수체
目的 利用基于荧光共振能量转移(Fluorescence resonance energy transfer,FRET)技术的检测PKC激活或PKC-delta激活的报告分子来确定PTH是否可以通过PLC非依赖途径激活PKC和PKC -delta.方法 将表达PKC激活报告分子(CKAR)的质粒和表达PKC-delta激活报告分子的质粒转染HEK293细胞,培养72h后通过共聚焦显微镜检测FRET的改变,并以此判断佛波酯(TPA)是否激活PKC和PKC-delta.将表达甲状旁腺素1型受体(PTHR1)的质粒与CKAR质粒或PKC-delta质粒共转染HEK293细胞,培养72h后通过共聚焦显微镜检测FRET的改变,并判断PTH( 1-34)、G1R19(1-34)和0.1％的三氟乙酸(TFA)对PKC和PKC-delta的作用.结果 在转染CKAR质粒或PKC-delta质粒的HEK293细胞,TPA均使青色荧光与黄色荧光的强度之比(C/Y)增加.在共转染PTH1R质粒与CKAR质粒或PKC-delta质粒的HEK293细胞,PTH( 1-34)和G1R19 (1-34)均增加了C/Y的值,而0.1％TFA未引起C/Y的改变.结论 PTH与PTHR1结合后通过PLC非依赖途径激活PKC/PKC-delta.
目的 利用基于熒光共振能量轉移(Fluorescence resonance energy transfer,FRET)技術的檢測PKC激活或PKC-delta激活的報告分子來確定PTH是否可以通過PLC非依賴途徑激活PKC和PKC -delta.方法 將錶達PKC激活報告分子(CKAR)的質粒和錶達PKC-delta激活報告分子的質粒轉染HEK293細胞,培養72h後通過共聚焦顯微鏡檢測FRET的改變,併以此判斷彿波酯(TPA)是否激活PKC和PKC-delta.將錶達甲狀徬腺素1型受體(PTHR1)的質粒與CKAR質粒或PKC-delta質粒共轉染HEK293細胞,培養72h後通過共聚焦顯微鏡檢測FRET的改變,併判斷PTH( 1-34)、G1R19(1-34)和0.1％的三氟乙痠(TFA)對PKC和PKC-delta的作用.結果 在轉染CKAR質粒或PKC-delta質粒的HEK293細胞,TPA均使青色熒光與黃色熒光的彊度之比(C/Y)增加.在共轉染PTH1R質粒與CKAR質粒或PKC-delta質粒的HEK293細胞,PTH( 1-34)和G1R19 (1-34)均增加瞭C/Y的值,而0.1％TFA未引起C/Y的改變.結論 PTH與PTHR1結閤後通過PLC非依賴途徑激活PKC/PKC-delta.
목적 이용기우형광공진능량전이(Fluorescence resonance energy transfer,FRET)기술적검측PKC격활혹PKC-delta격활적보고분자래학정PTH시부가이통과PLC비의뢰도경격활PKC화PKC -delta.방법 장표체PKC격활보고분자(CKAR)적질립화표체PKC-delta격활보고분자적질립전염HEK293세포,배양72h후통과공취초현미경검측FRET적개변,병이차판단불파지(TPA)시부격활PKC화PKC-delta.장표체갑상방선소1형수체(PTHR1)적질립여CKAR질립혹PKC-delta질립공전염HEK293세포,배양72h후통과공취초현미경검측FRET적개변,병판단PTH( 1-34)、G1R19(1-34)화0.1％적삼불을산(TFA)대PKC화PKC-delta적작용.결과 재전염CKAR질립혹PKC-delta질립적HEK293세포,TPA균사청색형광여황색형광적강도지비(C/Y)증가.재공전염PTH1R질립여CKAR질립혹PKC-delta질립적HEK293세포,PTH( 1-34)화G1R19 (1-34)균증가료C/Y적치,이0.1％TFA미인기C/Y적개변.결론 PTH여PTHR1결합후통과PLC비의뢰도경격활PKC/PKC-delta.
