中国动物传染病学报
中國動物傳染病學報
중국동물전염병학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY PARASITOLOGY
2010年
3期
66-72
,共7页
袁雪梅%陈宁%陈宇%王萍%童超%李得江%万婧%李肖梁%方维焕
袁雪梅%陳寧%陳宇%王萍%童超%李得江%萬婧%李肖樑%方維煥
원설매%진저%진우%왕평%동초%리득강%만청%리초량%방유환
猪瘟病毒%5'非编码区%荧光定量PCR
豬瘟病毒%5'非編碼區%熒光定量PCR
저온병독%5'비편마구%형광정량PCR
根据猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)5'端非编码区保守区域,设计猪瘟病毒特异性的引物和探针,建立了基于SYBR Green和TaqMan探针的两种荧光定量PCR检测方法.灵敏性和特异性试验结果表明,两种方法能够特异性地检测出不同型的猪瘟病毒,而对同属的牛病毒性腹泻病病毒以及其它一些主要猪病病原检测结果均为阴性.两种方法对猪瘟病毒C株的检测下限均为101TCID50,均高于常规的套式PCR.用携带该基因片段的重组质粒为模板进行检测,SYBR Green方法的检测下限为3×100copies,比TaqMan探针方法更加灵敏(3×101copies).应用建立的SYBR Green方法对2009年采集于浙江地区不同猪场的20份病猪样品进行CSFV检测,有8份样品为阳性,与套式PCR方法检测结果一致.进一步应用SYBR Green方法对不同感染阶段细胞内病毒RNA复制水平进行检测,与病毒滴度的结果基本一致.因此,本研究建立的SYBR Green荧光定量PCR检测方法能够应用于组织和培养细胞中猪瘟病毒的检测.
根據豬瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)5'耑非編碼區保守區域,設計豬瘟病毒特異性的引物和探針,建立瞭基于SYBR Green和TaqMan探針的兩種熒光定量PCR檢測方法.靈敏性和特異性試驗結果錶明,兩種方法能夠特異性地檢測齣不同型的豬瘟病毒,而對同屬的牛病毒性腹瀉病病毒以及其它一些主要豬病病原檢測結果均為陰性.兩種方法對豬瘟病毒C株的檢測下限均為101TCID50,均高于常規的套式PCR.用攜帶該基因片段的重組質粒為模闆進行檢測,SYBR Green方法的檢測下限為3×100copies,比TaqMan探針方法更加靈敏(3×101copies).應用建立的SYBR Green方法對2009年採集于浙江地區不同豬場的20份病豬樣品進行CSFV檢測,有8份樣品為暘性,與套式PCR方法檢測結果一緻.進一步應用SYBR Green方法對不同感染階段細胞內病毒RNA複製水平進行檢測,與病毒滴度的結果基本一緻.因此,本研究建立的SYBR Green熒光定量PCR檢測方法能夠應用于組織和培養細胞中豬瘟病毒的檢測.
근거저온병독(Classical swine fever virus, CSFV)5'단비편마구보수구역,설계저온병독특이성적인물화탐침,건립료기우SYBR Green화TaqMan탐침적량충형광정량PCR검측방법.령민성화특이성시험결과표명,량충방법능구특이성지검측출불동형적저온병독,이대동속적우병독성복사병병독이급기타일사주요저병병원검측결과균위음성.량충방법대저온병독C주적검측하한균위101TCID50,균고우상규적투식PCR.용휴대해기인편단적중조질립위모판진행검측,SYBR Green방법적검측하한위3×100copies,비TaqMan탐침방법경가령민(3×101copies).응용건립적SYBR Green방법대2009년채집우절강지구불동저장적20빈병저양품진행CSFV검측,유8빈양품위양성,여투식PCR방법검측결과일치.진일보응용SYBR Green방법대불동감염계단세포내병독RNA복제수평진행검측,여병독적도적결과기본일치.인차,본연구건립적SYBR Green형광정량PCR검측방법능구응용우조직화배양세포중저온병독적검측.
