临床肺科杂志
臨床肺科雜誌
림상폐과잡지
JOUNAL OF CLINICAL PULMONARY MEDICINE
2010年
12期
1709-1711
,共3页
熊志红%朱琰%孙昌文%庄玉辉%程小星
熊誌紅%硃琰%孫昌文%莊玉輝%程小星
웅지홍%주염%손창문%장옥휘%정소성
结核分枝杆菌%PE35%可溶性表达%纯化
結覈分枝桿菌%PE35%可溶性錶達%純化
결핵분지간균%PE35%가용성표체%순화
目的 利用大肠杆菌表达系统大量获得重组的结核分枝杆菌PE35蛋白,并初步评估其在结核病血清学诊断方面的价值.方法 用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv全基因组中获得PE35基因克隆到pET24b中,转化BL21(DE3)构建大肠杆菌表达株;聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定重组蛋白及其表达方式;使用Ni-sepharose纯化蛋白;Western-blot检测结核病人血清的抗结核抗体.结果 酶切鉴定和DNA序列分析显示构建了正确的pET-PE35原核表达载体,并能在大肠杆菌BL21(DE3)中可溶性地表达分子量大小相符的重组蛋白.纯化后的蛋白纯度达到90%以上,能与结核病人血清抗体结合.结论 成功地构建了pET-PE35原核表达载体,并获得较纯的重组PE35蛋白,此蛋白能检测结核病人血清抗体.为探讨PE35蛋白在结核病的基础研究与诊断运用奠定了基础.
目的 利用大腸桿菌錶達繫統大量穫得重組的結覈分枝桿菌PE35蛋白,併初步評估其在結覈病血清學診斷方麵的價值.方法 用聚閤酶鏈反應(PCR)方法從結覈分枝桿菌H37Rv全基因組中穫得PE35基因剋隆到pET24b中,轉化BL21(DE3)構建大腸桿菌錶達株;聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)鑒定重組蛋白及其錶達方式;使用Ni-sepharose純化蛋白;Western-blot檢測結覈病人血清的抗結覈抗體.結果 酶切鑒定和DNA序列分析顯示構建瞭正確的pET-PE35原覈錶達載體,併能在大腸桿菌BL21(DE3)中可溶性地錶達分子量大小相符的重組蛋白.純化後的蛋白純度達到90%以上,能與結覈病人血清抗體結閤.結論 成功地構建瞭pET-PE35原覈錶達載體,併穫得較純的重組PE35蛋白,此蛋白能檢測結覈病人血清抗體.為探討PE35蛋白在結覈病的基礎研究與診斷運用奠定瞭基礎.
목적 이용대장간균표체계통대량획득중조적결핵분지간균PE35단백,병초보평고기재결핵병혈청학진단방면적개치.방법 용취합매련반응(PCR)방법종결핵분지간균H37Rv전기인조중획득PE35기인극륭도pET24b중,전화BL21(DE3)구건대장간균표체주;취병희선알응효전영(SDS-PAGE)감정중조단백급기표체방식;사용Ni-sepharose순화단백;Western-blot검측결핵병인혈청적항결핵항체.결과 매절감정화DNA서렬분석현시구건료정학적pET-PE35원핵표체재체,병능재대장간균BL21(DE3)중가용성지표체분자량대소상부적중조단백.순화후적단백순도체도90%이상,능여결핵병인혈청항체결합.결론 성공지구건료pET-PE35원핵표체재체,병획득교순적중조PE35단백,차단백능검측결핵병인혈청항체.위탐토PE35단백재결핵병적기출연구여진단운용전정료기출.
