CAJ | 학술논문

目的动态观察Wnt诱导分泌蛋白3(wnt2 inducible secreted protein 3,WISP3)突变体软骨细胞C20/A4的Ⅱ型胶原合成和分泌特点,观察其在细胞内的超微定位和超微结构变化.方法用脉冲追踪法,在14C标记的脯氨酸下预WISP3突变体软骨细胞C20/A4后的不同时间点(30,60,120,180,240,300 min)收集细胞上清和细胞内蛋白,用液体闪烁系统检测胶原含量,用ELISA检测Ⅱ型胶原的量.用透视电镜观察突变型细胞的超微结构变化,用胶体金免疫电镜观察Ⅱ型胶原在突变型细胞内的超微定化.结果 (1)SW1353细胞及C20/A4细胞株在14C标记的脯氨酸干预后180 min,分泌到细胞培养上清的胶原及细胞内合成的胶原同时达到高峰;(2)与SW1353细胞及C20/A4细胞株比较,14C标记的脯氨酸干预后,WISP3突变型C20/A4细胞内的Ⅱ型胶原合成高峰提前到120 min,而WISP3过表达的C20/A4细胞胶原合成没有明显峰值,胶原分泌高峰均提前到120 min,胶原合成和分泌不同步.(3)透视电镜发现WISE3突变型C20/A4细胞有线粒体的肿胀、粗面内质网扩张,核膜皱缩.Ⅱ型胶原主要定位于内质网和细胞膜,排列稀疏,分布不均匀.结论 WISP3突变型C20/A4细胞的胶原合成高峰提前,胶原合成和分泌的规律和节律改变可能是SEDT-PA患者发病的机制之一.WISP3突变型C20/A4细胞超微结构的改变和Ⅱ型胶原的分布改变可能是SEDT-PA发病的病理基础.
목적 동태관찰Wnt유도분비단백3(wnt2 inducible secreted protein 3,WISP3)돌변체연골세포C20/A4적Ⅱ형효원합성화분비특점,관찰기재세포내적초미정위화초미결구변화.방법 용맥충추종법,재14C표기적포안산하예WISP3돌변체연골세포C20/A4후적불동시간점(30,60,120,180,240,300 min)수집세포상청화세포내단백,용액체섬삭계통검측효원함량,용ELISA검측Ⅱ형효원적량.용투시전경관찰돌변형세포적초미결구변화,용효체금면역전경관찰Ⅱ형효원재돌변형세포내적초미정화.결과 (1)SW1353세포급C20/A4세포주재14C표기적포안산간예후180 min,분비도세포배양상청적효원급세포내합성적효원동시체도고봉;(2)여SW1353세포급C20/A4세포주비교,14C표기적포안산간예후,WISP3돌변형C20/A4세포내적Ⅱ형효원합성고봉제전도120 min,이WISP3과표체적C20/A4세포효원합성몰유명현봉치,효원분비고봉균제전도120 min,효원합성화분비불동보.(3)투시전경발현WISE3돌변형C20/A4세포유선립체적종창、조면내질망확장,핵막추축.Ⅱ형효원주요정위우내질망화세포막,배렬희소,분포불균균.결론 WISP3돌변형C20/A4세포적효원합성고봉제전,효원합성화분비적규률화절률개변가능시SEDT-PA환자발병적궤제지일.WISP3돌변형C20/A4세포초미결구적개변화Ⅱ형효원적분포개변가능시SEDT-PA발병적병리기출.