徐州医学院学报
徐州醫學院學報
서주의학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE XUZHOU
2011年
2期
84-88
,共5页
王正%董红燕%张中明%张昊%袁延亮%陈李李%石合现
王正%董紅燕%張中明%張昊%袁延亮%陳李李%石閤現
왕정%동홍연%장중명%장호%원연량%진리리%석합현
PEDF基因%RNA干扰%慢病毒载体
PEDF基因%RNA榦擾%慢病毒載體
PEDF기인%RNA간우%만병독재체
目的 构建针对大鼠PEDF 基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体并进行鉴定,探讨PEDF基因对缺血心肌血管新生的影响.方法 构建PEDF基因过表达质粒,测序鉴定.针对PEDF基因不同干扰靶点构建4种RNAi 病毒载体质粒pGCsi-U6/Neo/GFP/shRNA,测序鉴定.过表达质粒和RNAi质粒共转染293T细胞后应用Western blot方法进行外源筛靶确定PEDF基因RNAi 有效靶序列.有效RNAi 病毒质粒和其他3种辅助包装原件载体质粒通过Lipofectamine 2000共转染293T细胞,培养48 h后, 收集细胞培养上清液,将其浓缩后用孔稀释法测定病毒滴度.结果 过表达质粒及4种RNAi质粒构建成功.Western blot外源筛靶显示2个靶点能有效敲减目的基因的表达.PEDF shRNA慢病毒表达载体Serpinf1-RNAi-LV经293T细胞包装成功,收集293T细胞分泌的病毒上清测定浓缩病毒悬液的滴度为2×1012Tu/L.结论 成功构建了PEDF基因的RNAi慢病毒载体,为研究PEDF基因对缺血心肌血管新生的影响打下基础.
目的 構建針對大鼠PEDF 基因的RNA榦擾(RNAi)慢病毒錶達載體併進行鑒定,探討PEDF基因對缺血心肌血管新生的影響.方法 構建PEDF基因過錶達質粒,測序鑒定.針對PEDF基因不同榦擾靶點構建4種RNAi 病毒載體質粒pGCsi-U6/Neo/GFP/shRNA,測序鑒定.過錶達質粒和RNAi質粒共轉染293T細胞後應用Western blot方法進行外源篩靶確定PEDF基因RNAi 有效靶序列.有效RNAi 病毒質粒和其他3種輔助包裝原件載體質粒通過Lipofectamine 2000共轉染293T細胞,培養48 h後, 收集細胞培養上清液,將其濃縮後用孔稀釋法測定病毒滴度.結果 過錶達質粒及4種RNAi質粒構建成功.Western blot外源篩靶顯示2箇靶點能有效敲減目的基因的錶達.PEDF shRNA慢病毒錶達載體Serpinf1-RNAi-LV經293T細胞包裝成功,收集293T細胞分泌的病毒上清測定濃縮病毒懸液的滴度為2×1012Tu/L.結論 成功構建瞭PEDF基因的RNAi慢病毒載體,為研究PEDF基因對缺血心肌血管新生的影響打下基礎.
목적 구건침대대서PEDF 기인적RNA간우(RNAi)만병독표체재체병진행감정,탐토PEDF기인대결혈심기혈관신생적영향.방법 구건PEDF기인과표체질립,측서감정.침대PEDF기인불동간우파점구건4충RNAi 병독재체질립pGCsi-U6/Neo/GFP/shRNA,측서감정.과표체질립화RNAi질립공전염293T세포후응용Western blot방법진행외원사파학정PEDF기인RNAi 유효파서렬.유효RNAi 병독질립화기타3충보조포장원건재체질립통과Lipofectamine 2000공전염293T세포,배양48 h후, 수집세포배양상청액,장기농축후용공희석법측정병독적도.결과 과표체질립급4충RNAi질립구건성공.Western blot외원사파현시2개파점능유효고감목적기인적표체.PEDF shRNA만병독표체재체Serpinf1-RNAi-LV경293T세포포장성공,수집293T세포분비적병독상청측정농축병독현액적적도위2×1012Tu/L.결론 성공구건료PEDF기인적RNAi만병독재체,위연구PEDF기인대결혈심기혈관신생적영향타하기출.
