天津医科大学学报
天津醫科大學學報
천진의과대학학보
JOURNAL OF TIANJIN MEDICAL UNIVERSITY
2011年
2期
151-153,157
,共4页
孔凡铭%张新伟%于津浦%魏枫%李慧%任秀宝
孔凡銘%張新偉%于津浦%魏楓%李慧%任秀寶
공범명%장신위%우진포%위풍%리혜%임수보
iASPP%NIH3T3细胞%栽体构建%p53
iASPP%NIH3T3細胞%栽體構建%p53
iASPP%NIH3T3세포%재체구건%p53
目的:构建iASPP真核表达载体,稳定转染小鼠成纤维细胞(NIH3T3)并检测其表达,观察其对NIH3T3细胞增殖的影响.方法:设计引物以源克隆PCMV-iASPP为模板PCR扩增其中的CDS区,亚克隆入FLAG-pcDNA3.0,将该重组质粒转化DH5α感受态大肠埃希菌,筛选阳性克隆,经酶切、测序鉴定后,用脂质体介导转染NIH3T3细胞,G418加压筛选28 d,RT-PCR、Western blotting检测基因、蛋白表达;MTT法观察细胞增殖能力.结果:重组质粒鉴定正确,筛选所得阳性克隆中可以检测到iASPP基因的转录和表达,且该iASPP阳性表达细胞株增殖能力明显增强.结论:成功构建iASPP真核表达载体并成功构建稳定表达iASPP的NIH3T3细胞株,证明该基因的稳定表达在体外能显著增强NIH3T3细胞增殖能力.
目的:構建iASPP真覈錶達載體,穩定轉染小鼠成纖維細胞(NIH3T3)併檢測其錶達,觀察其對NIH3T3細胞增殖的影響.方法:設計引物以源剋隆PCMV-iASPP為模闆PCR擴增其中的CDS區,亞剋隆入FLAG-pcDNA3.0,將該重組質粒轉化DH5α感受態大腸埃希菌,篩選暘性剋隆,經酶切、測序鑒定後,用脂質體介導轉染NIH3T3細胞,G418加壓篩選28 d,RT-PCR、Western blotting檢測基因、蛋白錶達;MTT法觀察細胞增殖能力.結果:重組質粒鑒定正確,篩選所得暘性剋隆中可以檢測到iASPP基因的轉錄和錶達,且該iASPP暘性錶達細胞株增殖能力明顯增彊.結論:成功構建iASPP真覈錶達載體併成功構建穩定錶達iASPP的NIH3T3細胞株,證明該基因的穩定錶達在體外能顯著增彊NIH3T3細胞增殖能力.
목적:구건iASPP진핵표체재체,은정전염소서성섬유세포(NIH3T3)병검측기표체,관찰기대NIH3T3세포증식적영향.방법:설계인물이원극륭PCMV-iASPP위모판PCR확증기중적CDS구,아극륭입FLAG-pcDNA3.0,장해중조질립전화DH5α감수태대장애희균,사선양성극륭,경매절、측서감정후,용지질체개도전염NIH3T3세포,G418가압사선28 d,RT-PCR、Western blotting검측기인、단백표체;MTT법관찰세포증식능력.결과:중조질립감정정학,사선소득양성극륭중가이검측도iASPP기인적전록화표체,차해iASPP양성표체세포주증식능력명현증강.결론:성공구건iASPP진핵표체재체병성공구건은정표체iASPP적NIH3T3세포주,증명해기인적은정표체재체외능현저증강NIH3T3세포증식능력.
