CAJ | 학술논문

制备鸡(Gallus gallus)肝脏胆汁酸结合蛋白(L-BABP)的多克隆抗血清,并分析L-BABP的组织表达特性.利用RT-PCR扩增L-BABP基因的CDS区,构建鸡L-BABP基因的GST融合蛋白表达质粒pGEX-4T/L-BABP.将重组表达质粒转化到大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中,经IPTG诱导后产生GST/L-BABP融合蛋白,利用Glutathione Sepharose 4B亲和层析纯化目的蛋白,将纯化的GST/L-BABP融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗血清.诱导得到了1个38 kD(12 kDL-BABP+26 kD GST)的融合蛋白,经间接ELISA方法测定制备的抗血清效价为1:100 000.利用此抗血清分析鸡L-BABP的组织表达特性,结果表明该基因仅在肝脏组织中特异性表达,在肾、肺、腿肌、腺胃、胸肌、心脏、脂肪、脾、回肠、肌胃、空肠和十二指肠等12种组织中没有检测到表达信号.本研究制备的高效价、高特异性的鸡L-BABP抗血清,为从蛋白水平上深入研究L-BABP的生物学功能提供了良好的基础.
제비계(Gallus gallus)간장담즙산결합단백(L-BABP)적다극륭항혈청,병분석L-BABP적조직표체특성.이용RT-PCR확증L-BABP기인적CDS구,구건계L-BABP기인적GST융합단백표체질립pGEX-4T/L-BABP.장중조표체질립전화도대장간균(Escherichia coli)BL21중,경IPTG유도후산생GST/L-BABP융합단백,이용Glutathione Sepharose 4B친화층석순화목적단백,장순화적GST/L-BABP융합단백면역가토제비다극륭항혈청.유도득도료1개38 kD(12 kDL-BABP+26 kD GST)적융합단백,경간접ELISA방법측정제비적항혈청효개위1:100 000.이용차항혈청분석계L-BABP적조직표체특성,결과표명해기인부재간장조직중특이성표체,재신、폐、퇴기、선위、흉기、심장、지방、비、회장、기위、공장화십이지장등12충조직중몰유검측도표체신호.본연구제비적고효개、고특이성적계L-BABP항혈청,위종단백수평상심입연구L-BABP적생물학공능제공료량호적기출.