沈阳农业大学学报
瀋暘農業大學學報
침양농업대학학보
JOURNAL OF SHENYANG AGRICULTURAL UNIVERSITY
2011年
5期
559-564
,共6页
启动子%rd29A%35S%VaCBF3基因%植物表达载体
啟動子%rd29A%35S%VaCBF3基因%植物錶達載體
계동자%rd29A%35S%VaCBF3기인%식물표체재체
为了探索山葡萄CBF3基因(VaCBF3)对杨树的遗传转化的影响,及组成型启动子和诱导型启动子对转基因植株生长的影响,分别构建由2种类型启动子调控的植物表达载体.根据GenBank上公布的rd29A基因序列设计特异性引物,利用PCR方法从拟南芥基因组DNA中克隆rd29A基因启动子片段,利用限制性内切酶通过酶切、连接构建由组成型启动子35S和诱导型启动子rd29A基因启动子驱动的VaCBF3基因植物表达载体,利用冻融法完成重组质粒对根癌农杆菌LBA4404的转化.试验结果表明,所克隆的rd29A基因启动子片段序列分析表明该启动子片段长度为945bp,与GenBank中基因序列同源性达99％,具有DRE、ABRE、TATAbox和CAAT box4个完整的顺式作用元件,具有启动子功能.经过酶切、连接成功地将目的基因与载体质粒连接,并将重组质粒导入至根癌农杆菌LBA4404中,为下一步利用农杆菌介导法对杨树的遗传转化及研究2种启动子的启动效率奠定了一定的基础.
為瞭探索山葡萄CBF3基因(VaCBF3)對楊樹的遺傳轉化的影響,及組成型啟動子和誘導型啟動子對轉基因植株生長的影響,分彆構建由2種類型啟動子調控的植物錶達載體.根據GenBank上公佈的rd29A基因序列設計特異性引物,利用PCR方法從擬南芥基因組DNA中剋隆rd29A基因啟動子片段,利用限製性內切酶通過酶切、連接構建由組成型啟動子35S和誘導型啟動子rd29A基因啟動子驅動的VaCBF3基因植物錶達載體,利用凍融法完成重組質粒對根癌農桿菌LBA4404的轉化.試驗結果錶明,所剋隆的rd29A基因啟動子片段序列分析錶明該啟動子片段長度為945bp,與GenBank中基因序列同源性達99％,具有DRE、ABRE、TATAbox和CAAT box4箇完整的順式作用元件,具有啟動子功能.經過酶切、連接成功地將目的基因與載體質粒連接,併將重組質粒導入至根癌農桿菌LBA4404中,為下一步利用農桿菌介導法對楊樹的遺傳轉化及研究2種啟動子的啟動效率奠定瞭一定的基礎.
위료탐색산포도CBF3기인(VaCBF3)대양수적유전전화적영향,급조성형계동자화유도형계동자대전기인식주생장적영향,분별구건유2충류형계동자조공적식물표체재체.근거GenBank상공포적rd29A기인서렬설계특이성인물,이용PCR방법종의남개기인조DNA중극륭rd29A기인계동자편단,이용한제성내절매통과매절、련접구건유조성형계동자35S화유도형계동자rd29A기인계동자구동적VaCBF3기인식물표체재체,이용동융법완성중조질립대근암농간균LBA4404적전화.시험결과표명,소극륭적rd29A기인계동자편단서렬분석표명해계동자편단장도위945bp,여GenBank중기인서렬동원성체99％,구유DRE、ABRE、TATAbox화CAAT box4개완정적순식작용원건,구유계동자공능.경과매절、련접성공지장목적기인여재체질립련접,병장중조질립도입지근암농간균LBA4404중,위하일보이용농간균개도법대양수적유전전화급연구2충계동자적계동효솔전정료일정적기출.
