国际泌尿系统杂志
國際泌尿繫統雜誌
국제비뇨계통잡지
INTERNATIONAL JOURNAL OF UROLOGY AND NEPHROLOGY
2008年
2期
145-148
,共4页
沈肖方%连培文%李芹%赵欣%王海燕%李建远
瀋肖方%連培文%李芹%趙訢%王海燕%李建遠
침초방%련배문%리근%조흔%왕해연%리건원
目的 构建人附睾ESCA2(hESCA2)的真核表达载体,分析其在COS-7细胞中的表达.方法 从人附睾cDNA文库中PCR扩增hESCA2片段,通过DNA重组构建真核表达载体pEGFP-N1-hESC42,瞬时转染COS-7细胞,应用RT-PCR、激光扫描共聚焦技术和Western blot检测融合蛋白的表达.结果 成功地构建了真核表达载体pEGFP-N1-hESC42;以重组载体转染COS-7细胞后,RT-PCR结果 显示hESC42与EGFP在mRNA水平正确拼接;共聚焦证实有hESCA2融合蛋白的表达;转染细胞的培养上清浓缩后,进行SDS-PAGE及Western blot分析,可检出hESC42融合蛋白的表达.结论 成功地构建了hESC42基因,并可在COS-7细胞中分泌表达,为其功能研究提供线索.
目的 構建人附睪ESCA2(hESCA2)的真覈錶達載體,分析其在COS-7細胞中的錶達.方法 從人附睪cDNA文庫中PCR擴增hESCA2片段,通過DNA重組構建真覈錶達載體pEGFP-N1-hESC42,瞬時轉染COS-7細胞,應用RT-PCR、激光掃描共聚焦技術和Western blot檢測融閤蛋白的錶達.結果 成功地構建瞭真覈錶達載體pEGFP-N1-hESC42;以重組載體轉染COS-7細胞後,RT-PCR結果 顯示hESC42與EGFP在mRNA水平正確拼接;共聚焦證實有hESCA2融閤蛋白的錶達;轉染細胞的培養上清濃縮後,進行SDS-PAGE及Western blot分析,可檢齣hESC42融閤蛋白的錶達.結論 成功地構建瞭hESC42基因,併可在COS-7細胞中分泌錶達,為其功能研究提供線索.
목적 구건인부고ESCA2(hESCA2)적진핵표체재체,분석기재COS-7세포중적표체.방법 종인부고cDNA문고중PCR확증hESCA2편단,통과DNA중조구건진핵표체재체pEGFP-N1-hESC42,순시전염COS-7세포,응용RT-PCR、격광소묘공취초기술화Western blot검측융합단백적표체.결과 성공지구건료진핵표체재체pEGFP-N1-hESC42;이중조재체전염COS-7세포후,RT-PCR결과 현시hESC42여EGFP재mRNA수평정학병접;공취초증실유hESCA2융합단백적표체;전염세포적배양상청농축후,진행SDS-PAGE급Western blot분석,가검출hESC42융합단백적표체.결론 성공지구건료hESC42기인,병가재COS-7세포중분비표체,위기공능연구제공선색.
