第一军医大学学报
第一軍醫大學學報
제일군의대학학보
JOURNAL OF FIRST MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2002年
7期
620-623
,共4页
吴昆%陈晓光%李华%支国舟
吳昆%陳曉光%李華%支國舟
오곤%진효광%리화%지국주
弓形体属%棒状体蛋白2%疫苗%基因重组%基因表达%疫苗%克隆
弓形體屬%棒狀體蛋白2%疫苗%基因重組%基因錶達%疫苗%剋隆
궁형체속%봉상체단백2%역묘%기인중조%기인표체%역묘%극륭
目的构建弓形虫棒状体蛋白2(ROP2)基因真核表达重组质粒.方法根据ROP2基因已知序列,设计合成一对引物,上、下游引物分别引入EcoRⅠ、SdⅠ酶切位点,用PCR方法从弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码ROP2的基因片段,插入pGEX-4T-l质粒,构建原核表达重组质粒pGEX-4T-1-ROP2,而后经EcoRⅠ、Not Ⅰ双酶切出ROP2基因片段,再亚克隆到载体pcDNA3中构建真核表达重组质粒pcDNA3-ROP2.结果ROP2基因体外扩增产物大小约1 043bp,重组质粒经酶切及PCR鉴定表明获得正确重组子,克隆基因测序结果与已知序列基本吻合.结论在国内首次克隆了弓形虫ROP2基因并构建了真核表达质粒pcDNA3-ROP2,为下一步弓形虫DNA疫苗研究打下了基础.
目的構建弓形蟲棒狀體蛋白2(ROP2)基因真覈錶達重組質粒.方法根據ROP2基因已知序列,設計閤成一對引物,上、下遊引物分彆引入EcoRⅠ、SdⅠ酶切位點,用PCR方法從弓形蟲RH株基因組DNA中擴增編碼ROP2的基因片段,插入pGEX-4T-l質粒,構建原覈錶達重組質粒pGEX-4T-1-ROP2,而後經EcoRⅠ、Not Ⅰ雙酶切齣ROP2基因片段,再亞剋隆到載體pcDNA3中構建真覈錶達重組質粒pcDNA3-ROP2.結果ROP2基因體外擴增產物大小約1 043bp,重組質粒經酶切及PCR鑒定錶明穫得正確重組子,剋隆基因測序結果與已知序列基本吻閤.結論在國內首次剋隆瞭弓形蟲ROP2基因併構建瞭真覈錶達質粒pcDNA3-ROP2,為下一步弓形蟲DNA疫苗研究打下瞭基礎.
목적구건궁형충봉상체단백2(ROP2)기인진핵표체중조질립.방법근거ROP2기인이지서렬,설계합성일대인물,상、하유인물분별인입EcoRⅠ、SdⅠ매절위점,용PCR방법종궁형충RH주기인조DNA중확증편마ROP2적기인편단,삽입pGEX-4T-l질립,구건원핵표체중조질립pGEX-4T-1-ROP2,이후경EcoRⅠ、Not Ⅰ쌍매절출ROP2기인편단,재아극륭도재체pcDNA3중구건진핵표체중조질립pcDNA3-ROP2.결과ROP2기인체외확증산물대소약1 043bp,중조질립경매절급PCR감정표명획득정학중조자,극륭기인측서결과여이지서렬기본문합.결론재국내수차극륭료궁형충ROP2기인병구건료진핵표체질립pcDNA3-ROP2,위하일보궁형충DNA역묘연구타하료기출.
