中国美容医学
中國美容醫學
중국미용의학
CHINESE JOURNAL OF AESTHETIC MEDICINE
2007年
1期
7-10
,共4页
雷永红%付小兵%盛志勇%鲁开化%赵京禹%孙同柱%韩冰%陈伟
雷永紅%付小兵%盛誌勇%魯開化%趙京禹%孫同柱%韓冰%陳偉
뢰영홍%부소병%성지용%로개화%조경우%손동주%한빙%진위
成体干细胞%基因治疗%随意型皮瓣
成體榦細胞%基因治療%隨意型皮瓣
성체간세포%기인치료%수의형피판
目的:探讨人血管内皮细胞生长因子(VEGF165)基因转染大鼠脂肪干细胞(rADSCs)的稳定表达系统对皮瓣成活的影响.方法:①培养和鉴定大鼠ADSCs,脂质体介导pcDNA3.1-VEGF165质粒转染大鼠(rADSCs),经G418筛选抗性rADSCs并继续培养4周,用ELISA法检测转染后细胞培养上清中VEGF浓度.②Brdu标记被转染rADSCs后,在大鼠背部制备8.0cm×2.5cm的随意型皮瓣模型,实验组(10只大鼠)为注射pcDNA3.1-VEGF165质粒转染的rADSCs悬液到大鼠腹腔,对照组(8只大鼠)为注射2ml被空载体pcDNA3.1(-)转染的rADSCs悬液,术后7天用透明纸描记法记录皮瓣成活范围,记数坐标纸格子并换算为成活面积百分率.分别于术后3天、5天、7天在成活皮瓣的远端切取皮瓣组织标本行免疫组化染色.结果:①ELISA检测4株转染和经G418筛选抗性并继续培养2周的第二代rADSCs上清中VEGF浓度多达(4.21±0.35)pmol VEGF/1×106细胞/48h((-x)±s,n=4),有2株细胞培养液上清分泌VEGF较强,其余2株细胞相对较弱,均大于对照的空载体转染组和未转染组rADSCs培养液上清中的(0.49±0.15)pmol VEGF/1×106细胞/48h((-x)±s,n=3)和(0.62±0.86)pmol VEGF/1×106细胞/48h ((-x)±s,n=3),均p＜0.01,差异有统计学意义.分泌VEGF较强的rADSCs经Brdu标记后阳性率达到70%以上.②将获得的稳定表达VEGF165的rADSCs移植到随意型皮瓣动物模型体内,7天后实验组皮瓣的成活面积为(59.6±0.52)%,大于对照组的皮瓣成活面积(40.5±0.27)%(p＜0.01).成活皮瓣的远端组织标本切片在显微镜下可见皮下脂肪中有大量核仁深染棕黄色的细胞.结论:ADSCs可以作为载体细胞运送VEGF基因到达皮瓣远端并通过分泌VEGF提高皮瓣的成活面积.
目的:探討人血管內皮細胞生長因子(VEGF165)基因轉染大鼠脂肪榦細胞(rADSCs)的穩定錶達繫統對皮瓣成活的影響.方法:①培養和鑒定大鼠ADSCs,脂質體介導pcDNA3.1-VEGF165質粒轉染大鼠(rADSCs),經G418篩選抗性rADSCs併繼續培養4週,用ELISA法檢測轉染後細胞培養上清中VEGF濃度.②Brdu標記被轉染rADSCs後,在大鼠揹部製備8.0cm×2.5cm的隨意型皮瓣模型,實驗組(10隻大鼠)為註射pcDNA3.1-VEGF165質粒轉染的rADSCs懸液到大鼠腹腔,對照組(8隻大鼠)為註射2ml被空載體pcDNA3.1(-)轉染的rADSCs懸液,術後7天用透明紙描記法記錄皮瓣成活範圍,記數坐標紙格子併換算為成活麵積百分率.分彆于術後3天、5天、7天在成活皮瓣的遠耑切取皮瓣組織標本行免疫組化染色.結果:①ELISA檢測4株轉染和經G418篩選抗性併繼續培養2週的第二代rADSCs上清中VEGF濃度多達(4.21±0.35)pmol VEGF/1×106細胞/48h((-x)±s,n=4),有2株細胞培養液上清分泌VEGF較彊,其餘2株細胞相對較弱,均大于對照的空載體轉染組和未轉染組rADSCs培養液上清中的(0.49±0.15)pmol VEGF/1×106細胞/48h((-x)±s,n=3)和(0.62±0.86)pmol VEGF/1×106細胞/48h ((-x)±s,n=3),均p＜0.01,差異有統計學意義.分泌VEGF較彊的rADSCs經Brdu標記後暘性率達到70%以上.②將穫得的穩定錶達VEGF165的rADSCs移植到隨意型皮瓣動物模型體內,7天後實驗組皮瓣的成活麵積為(59.6±0.52)%,大于對照組的皮瓣成活麵積(40.5±0.27)%(p＜0.01).成活皮瓣的遠耑組織標本切片在顯微鏡下可見皮下脂肪中有大量覈仁深染棕黃色的細胞.結論:ADSCs可以作為載體細胞運送VEGF基因到達皮瓣遠耑併通過分泌VEGF提高皮瓣的成活麵積.
목적:탐토인혈관내피세포생장인자(VEGF165)기인전염대서지방간세포(rADSCs)적은정표체계통대피판성활적영향.방법:①배양화감정대서ADSCs,지질체개도pcDNA3.1-VEGF165질립전염대서(rADSCs),경G418사선항성rADSCs병계속배양4주,용ELISA법검측전염후세포배양상청중VEGF농도.②Brdu표기피전염rADSCs후,재대서배부제비8.0cm×2.5cm적수의형피판모형,실험조(10지대서)위주사pcDNA3.1-VEGF165질립전염적rADSCs현액도대서복강,대조조(8지대서)위주사2ml피공재체pcDNA3.1(-)전염적rADSCs현액,술후7천용투명지묘기법기록피판성활범위,기수좌표지격자병환산위성활면적백분솔.분별우술후3천、5천、7천재성활피판적원단절취피판조직표본행면역조화염색.결과:①ELISA검측4주전염화경G418사선항성병계속배양2주적제이대rADSCs상청중VEGF농도다체(4.21±0.35)pmol VEGF/1×106세포/48h((-x)±s,n=4),유2주세포배양액상청분비VEGF교강,기여2주세포상대교약,균대우대조적공재체전염조화미전염조rADSCs배양액상청중적(0.49±0.15)pmol VEGF/1×106세포/48h((-x)±s,n=3)화(0.62±0.86)pmol VEGF/1×106세포/48h ((-x)±s,n=3),균p＜0.01,차이유통계학의의.분비VEGF교강적rADSCs경Brdu표기후양성솔체도70%이상.②장획득적은정표체VEGF165적rADSCs이식도수의형피판동물모형체내,7천후실험조피판적성활면적위(59.6±0.52)%,대우대조조적피판성활면적(40.5±0.27)%(p＜0.01).성활피판적원단조직표본절편재현미경하가견피하지방중유대량핵인심염종황색적세포.결론:ADSCs가이작위재체세포운송VEGF기인도체피판원단병통과분비VEGF제고피판적성활면적.
