渔业科学进展
漁業科學進展
어업과학진전
MARINE FISHERIES RESEARCH
2009年
3期
55-61
,共7页
吴成龙%史成银%黄倢%孔晓瑜
吳成龍%史成銀%黃倢%孔曉瑜
오성룡%사성은%황첩%공효유
大菱鲆红体病虹彩病毒%主要衣壳蛋白%毕赤酵母%表达
大蔆鲆紅體病虹綵病毒%主要衣殼蛋白%畢赤酵母%錶達
대릉평홍체병홍채병독%주요의각단백%필적효모%표체
依据大菱鲆红体病虹彩病毒(Turbot viral reddish body iridovirus,TRBIV)主要衣壳蛋白(Major capsid protein,MCP)基因序列,设计了一对特异性引物,并在正反向引物中分别引入EcoR I和Not I酶切位点,从而将PCR扩增得到的TRBIV MCP基因双酶切后定向克隆到真核表达载体pGAPZαA的GAP启动子的下游位点,并电转化入大肠杆菌DH5α宿主菌内.经抗生素Zeocin筛选、PCR、EcoR I和Not I双酶切以及测序分析,构建了含有α-factor信号肽的真核重组表达载体pGAPZαA MCP.重组表达质粒pGAPZαA MCP经Avr Ⅱ单酶切后电转导入毕赤酵母X-33中,挑选阳性克隆,提取表达上清经SDS-PAGE和Western-blot免疫印迹分析.结果显示,TRBIV MCP基因在酵母中成功实现分泌表达.阳性重组酵母菌经过72 h诱导培养后,重组TRBIV MCP的表达量高达60.2 μg/ml 左右.
依據大蔆鲆紅體病虹綵病毒(Turbot viral reddish body iridovirus,TRBIV)主要衣殼蛋白(Major capsid protein,MCP)基因序列,設計瞭一對特異性引物,併在正反嚮引物中分彆引入EcoR I和Not I酶切位點,從而將PCR擴增得到的TRBIV MCP基因雙酶切後定嚮剋隆到真覈錶達載體pGAPZαA的GAP啟動子的下遊位點,併電轉化入大腸桿菌DH5α宿主菌內.經抗生素Zeocin篩選、PCR、EcoR I和Not I雙酶切以及測序分析,構建瞭含有α-factor信號肽的真覈重組錶達載體pGAPZαA MCP.重組錶達質粒pGAPZαA MCP經Avr Ⅱ單酶切後電轉導入畢赤酵母X-33中,挑選暘性剋隆,提取錶達上清經SDS-PAGE和Western-blot免疫印跡分析.結果顯示,TRBIV MCP基因在酵母中成功實現分泌錶達.暘性重組酵母菌經過72 h誘導培養後,重組TRBIV MCP的錶達量高達60.2 μg/ml 左右.
의거대릉평홍체병홍채병독(Turbot viral reddish body iridovirus,TRBIV)주요의각단백(Major capsid protein,MCP)기인서렬,설계료일대특이성인물,병재정반향인물중분별인입EcoR I화Not I매절위점,종이장PCR확증득도적TRBIV MCP기인쌍매절후정향극륭도진핵표체재체pGAPZαA적GAP계동자적하유위점,병전전화입대장간균DH5α숙주균내.경항생소Zeocin사선、PCR、EcoR I화Not I쌍매절이급측서분석,구건료함유α-factor신호태적진핵중조표체재체pGAPZαA MCP.중조표체질립pGAPZαA MCP경Avr Ⅱ단매절후전전도입필적효모X-33중,도선양성극륭,제취표체상청경SDS-PAGE화Western-blot면역인적분석.결과현시,TRBIV MCP기인재효모중성공실현분비표체.양성중조효모균경과72 h유도배양후,중조TRBIV MCP적표체량고체60.2 μg/ml 좌우.
