组织工程与重建外科杂志
組織工程與重建外科雜誌
조직공정여중건외과잡지
JOURNAL OF TISSUE ENGINEERING AND RECONSTRUCTIVE SURGERY
2011年
5期
248-253
,共6页
吕晓杰%周广东%马俐君%刘霞%曹谊林
呂曉傑%週廣東%馬俐君%劉霞%曹誼林
려효걸%주엄동%마리군%류하%조의림
增强型绿色荧光蛋白%逆转录病毒%细胞标记%组织工程
增彊型綠色熒光蛋白%逆轉錄病毒%細胞標記%組織工程
증강형록색형광단백%역전록병독%세포표기%조직공정
目的 研究影响增强型绿色荧光蛋白(EGFP)逆转录病毒表达系统转染活细胞效率的主要相关参数,建立一种稳定高效的活细胞EGFP标记技术.方法 培养、扩增携带EGFP逆转录病毒载体的包装细胞PGl3,分别于12h、24h、36 h和48 h收集病毒液,转染骨髓基质细胞(BMSCs),通过流式细胞仪和荧光显微镜检测不同时间点病毒转染效率.选择转染率最高时间点的病毒液,连续转染BMSCs两次,小剂量嘌呤霉素筛选6h,观察病毒转染率及细胞活力.再以上述方法转染脂肪基质细胞(ADSCs)和成纤维细胞(FBs),观察这种方法标记其他干细胞或成熟分化细胞的可行性.结果 根据流式细胞仪及荧光显微镜观察结果,24h收集的病毒液转染BMSCs效率最高(64.56±2.53)％,36 h次之(56.98±3.22)％,12 h(47.39+1.82)％与48 h(37.84±1.77)％相对较低.连续转染两次并经短暂筛选后,BMSCs转染率可达80％以上,且细胞活力不受影响.采用相同方法转染脂肪基质细胞(ADSCs)和成纤维细胞(FBs),转染率均能达到80％,且细胞形态、增殖能力均未见明显改变.结论 本实验建立了一种稳定高效的活细胞EGFP转染技术,为研究组织工程种子细胞的体内、外转归及细胞间相互作用提供了稳定且直观的检测手段.
目的 研究影響增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)逆轉錄病毒錶達繫統轉染活細胞效率的主要相關參數,建立一種穩定高效的活細胞EGFP標記技術.方法 培養、擴增攜帶EGFP逆轉錄病毒載體的包裝細胞PGl3,分彆于12h、24h、36 h和48 h收集病毒液,轉染骨髓基質細胞(BMSCs),通過流式細胞儀和熒光顯微鏡檢測不同時間點病毒轉染效率.選擇轉染率最高時間點的病毒液,連續轉染BMSCs兩次,小劑量嘌呤黴素篩選6h,觀察病毒轉染率及細胞活力.再以上述方法轉染脂肪基質細胞(ADSCs)和成纖維細胞(FBs),觀察這種方法標記其他榦細胞或成熟分化細胞的可行性.結果 根據流式細胞儀及熒光顯微鏡觀察結果,24h收集的病毒液轉染BMSCs效率最高(64.56±2.53)％,36 h次之(56.98±3.22)％,12 h(47.39+1.82)％與48 h(37.84±1.77)％相對較低.連續轉染兩次併經短暫篩選後,BMSCs轉染率可達80％以上,且細胞活力不受影響.採用相同方法轉染脂肪基質細胞(ADSCs)和成纖維細胞(FBs),轉染率均能達到80％,且細胞形態、增殖能力均未見明顯改變.結論 本實驗建立瞭一種穩定高效的活細胞EGFP轉染技術,為研究組織工程種子細胞的體內、外轉歸及細胞間相互作用提供瞭穩定且直觀的檢測手段.
목적 연구영향증강형록색형광단백(EGFP)역전록병독표체계통전염활세포효솔적주요상관삼수,건립일충은정고효적활세포EGFP표기기술.방법 배양、확증휴대EGFP역전록병독재체적포장세포PGl3,분별우12h、24h、36 h화48 h수집병독액,전염골수기질세포(BMSCs),통과류식세포의화형광현미경검측불동시간점병독전염효솔.선택전염솔최고시간점적병독액,련속전염BMSCs량차,소제량표령매소사선6h,관찰병독전염솔급세포활력.재이상술방법전염지방기질세포(ADSCs)화성섬유세포(FBs),관찰저충방법표기기타간세포혹성숙분화세포적가행성.결과 근거류식세포의급형광현미경관찰결과,24h수집적병독액전염BMSCs효솔최고(64.56±2.53)％,36 h차지(56.98±3.22)％,12 h(47.39+1.82)％여48 h(37.84±1.77)％상대교저.련속전염량차병경단잠사선후,BMSCs전염솔가체80％이상,차세포활력불수영향.채용상동방법전염지방기질세포(ADSCs)화성섬유세포(FBs),전염솔균능체도80％,차세포형태、증식능력균미견명현개변.결론 본실험건립료일충은정고효적활세포EGFP전염기술,위연구조직공정충자세포적체내、외전귀급세포간상호작용제공료은정차직관적검측수단.
