中华皮肤科杂志
中華皮膚科雜誌
중화피부과잡지
Chinese Journal of Dermatology
2007年
5期
267-270
,共4页
陈贤祯%程浩%汤晓燕%张行%朱可建%叶俊%林爱华%岑建萍%金纳
陳賢禎%程浩%湯曉燕%張行%硃可建%葉俊%林愛華%岑建萍%金納
진현정%정호%탕효연%장행%주가건%협준%림애화%잠건평%금납
基因沉默%RNA干预%乳头状瘤病毒,人
基因沉默%RNA榦預%乳頭狀瘤病毒,人
기인침묵%RNA간예%유두상류병독,인
目的 探讨RNA干预技术的两种形式在体外对人乳头瘤病毒(HPV)11型E7基因的沉默作用.方法 化学合成1对小片段干扰RNA(siRNA-11E7),同时构建3个短发夹状小RNA(shRNA)表达质粒(pRNAT-11E7 1#、2#、3#),分别转染稳定表达HPV11E7的C57BL/6小鼠黑素瘤细胞系B16细胞株,采用实时荧光定量PCR技术检测细胞转染前后靶基因mRNA的表达水平.结果 siRNA-11E7转染细胞后6、12、24、48、72、96、120 h对靶基因表达的抑制率分别为12.60%、31.41%、41.93%、42.93%、74.35%、32.71%、29.00%;最佳作用浓度为25 nmol/L(抑制率70.06%),最低作用浓度可至3.13 nmol/L(抑制率47.00%).以0.4 μg pRNAT-11E7 1#、2#、3#及上述3个质粒等量混合转染细胞72 h后对靶基因表达的抑制率分别达44.52%、59.26%、89.62%、54.09%,阴性质粒无干预作用.pRNAT-11E7 3#作用6、12、24、48、72、96、120 h对靶基因表达抑制率分别为0、17.50%、40.90%、42.40%、61.90%、51 50%、0%;最佳作用剂量0.2 μg.结论 siRNA及shRNA表达载体均可在体外安全高效地沉默HPV11E7基因的表达,其干预作用存在一定的量效性和时效性,且可能存在最佳作用浓度(剂量)和最佳作用时间.
目的 探討RNA榦預技術的兩種形式在體外對人乳頭瘤病毒(HPV)11型E7基因的沉默作用.方法 化學閤成1對小片段榦擾RNA(siRNA-11E7),同時構建3箇短髮夾狀小RNA(shRNA)錶達質粒(pRNAT-11E7 1#、2#、3#),分彆轉染穩定錶達HPV11E7的C57BL/6小鼠黑素瘤細胞繫B16細胞株,採用實時熒光定量PCR技術檢測細胞轉染前後靶基因mRNA的錶達水平.結果 siRNA-11E7轉染細胞後6、12、24、48、72、96、120 h對靶基因錶達的抑製率分彆為12.60%、31.41%、41.93%、42.93%、74.35%、32.71%、29.00%;最佳作用濃度為25 nmol/L(抑製率70.06%),最低作用濃度可至3.13 nmol/L(抑製率47.00%).以0.4 μg pRNAT-11E7 1#、2#、3#及上述3箇質粒等量混閤轉染細胞72 h後對靶基因錶達的抑製率分彆達44.52%、59.26%、89.62%、54.09%,陰性質粒無榦預作用.pRNAT-11E7 3#作用6、12、24、48、72、96、120 h對靶基因錶達抑製率分彆為0、17.50%、40.90%、42.40%、61.90%、51 50%、0%;最佳作用劑量0.2 μg.結論 siRNA及shRNA錶達載體均可在體外安全高效地沉默HPV11E7基因的錶達,其榦預作用存在一定的量效性和時效性,且可能存在最佳作用濃度(劑量)和最佳作用時間.
목적 탐토RNA간예기술적량충형식재체외대인유두류병독(HPV)11형E7기인적침묵작용.방법 화학합성1대소편단간우RNA(siRNA-11E7),동시구건3개단발협상소RNA(shRNA)표체질립(pRNAT-11E7 1#、2#、3#),분별전염은정표체HPV11E7적C57BL/6소서흑소류세포계B16세포주,채용실시형광정량PCR기술검측세포전염전후파기인mRNA적표체수평.결과 siRNA-11E7전염세포후6、12、24、48、72、96、120 h대파기인표체적억제솔분별위12.60%、31.41%、41.93%、42.93%、74.35%、32.71%、29.00%;최가작용농도위25 nmol/L(억제솔70.06%),최저작용농도가지3.13 nmol/L(억제솔47.00%).이0.4 μg pRNAT-11E7 1#、2#、3#급상술3개질립등량혼합전염세포72 h후대파기인표체적억제솔분별체44.52%、59.26%、89.62%、54.09%,음성질립무간예작용.pRNAT-11E7 3#작용6、12、24、48、72、96、120 h대파기인표체억제솔분별위0、17.50%、40.90%、42.40%、61.90%、51 50%、0%;최가작용제량0.2 μg.결론 siRNA급shRNA표체재체균가재체외안전고효지침묵HPV11E7기인적표체,기간예작용존재일정적량효성화시효성,차가능존재최가작용농도(제량)화최가작용시간.
