中华器官移植杂志
中華器官移植雜誌
중화기관이식잡지
CHINESE JOURNAL OF ORGAN TRANSPLANTATION
2008年
9期
526-530
,共5页
抗淋巴细胞血清%CD4阳性 T淋巴细胞%CD8阳性 T淋巴细胞%基因表达%白细胞介素类
抗淋巴細胞血清%CD4暘性 T淋巴細胞%CD8暘性 T淋巴細胞%基因錶達%白細胞介素類
항림파세포혈청%CD4양성 T림파세포%CD8양성 T림파세포%기인표체%백세포개소류
Antilymphocyte serum%CD4-positive T-lymphocytes%CDS-positive T-lymphocytes%Gene expression%Interleukins
目的 探讨兔抗人胸腺细胞多克隆抗体(RATG)在体外对CD4+细胞和CD8+细胞共刺激分子基因表达和细胞因子分泌的影响.方法 从正常成人外周血单个核细胞中分离和纯化CD4+细胞和CD8+细胞,加入RATG,37℃下培养.分别于24、48和72 h收集培养上清液和细胞,以不处理的细胞为正常对照,正常兔Ig处理的细胞作为阴性对照.采用实时聚合酶链反应技术检测培养细胞的细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA4)、CD154、Foxp3、OX40、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)、IL-10和IL-2受体(CD25)的基因表达水平,应用Multiplex检测技术测定培养上清液中IFIN-γ、IL-2、IL_4和IL-10的水平.结果 与正常CD4+细胞比较,加入RATG的CD4+细胞培养24 h,其CTLA-4、CD154、Foxp3、OX40、IFN-γ、IL-2、IL-10和CD25基因转录表达均上调,阴性对照CD4+细胞则无这些基因转录表达的上调.处理48 h后,CD4+细胞的CD154和IL-2的基因转录表达呈现下调现象,而CTLA4、Foxp3、0X40、IFN-γ、IL-10和CD25的基因转录水平均较24 h时明显降低.处理72 h后,CD4+细胞的CTLA4、Foxp3、OX40和CD25的基因转录表达再次呈现高水平,CD154和IFN-γ的基因转录表达上调表达不明显,而IL-2和IL-10的基因转录表达则呈现明显的下调.RATG处理的CD4+细胞培养上清液中的IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10浓度显著增加,以处理24 h的水平最高,而阴性对照者未测出.与正常CD8+细胞相比较,加入RATG处理的CD8+细胞培养24 h,其CTLA4、Foxp3、OX40、IFN-γ,、IL-2、IL-10和CD25的基因转录表达呈现明显上调,而CD154基因转录表达稍有下调.RATG处理48 h,CD8+细胞的CTLA4、Foxp3、OX40、IFN-γ和CD25基因转录表达仍维持在高水平,CD154基因转录表达仅仅呈现低水平的上调,IL-10基因转录表达水平显著下降,而IL-2的基因转录表达则明显下调.处理72 h,CD8+细胞的CTLA4、Foxp3、OX40、IFN-γ、IL-10和CD25的基因转录表达仍维持在高水平,CD154基因转录表达则呈现下调,而IL-2基因转录表达的下调更为显著.阴性对照CD8+细胞则未呈现这些基因转录的上调现象.RATG处理的CD8+细胞培养上清液中IFN-γ、IL-2和IL-10显著增多,以处理24 h的浓度最高,IL-4浓度升高的幅度较小,而正常CD8+细胞和阴性对照CD8+细胞几乎检测不到IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10.结论 在体外,RATG可以刺激CD4+细胞和CD8+细胞上调多种促进免疫抑制的共刺激分子基因表达,促进其分泌与免疫调节相关的IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10.
目的 探討兔抗人胸腺細胞多剋隆抗體(RATG)在體外對CD4+細胞和CD8+細胞共刺激分子基因錶達和細胞因子分泌的影響.方法 從正常成人外週血單箇覈細胞中分離和純化CD4+細胞和CD8+細胞,加入RATG,37℃下培養.分彆于24、48和72 h收集培養上清液和細胞,以不處理的細胞為正常對照,正常兔Ig處理的細胞作為陰性對照.採用實時聚閤酶鏈反應技術檢測培養細胞的細胞毒性T淋巴細胞相關抗原4(CTLA4)、CD154、Foxp3、OX40、γ榦擾素(IFN-γ)、白細胞介素2(IL-2)、IL-10和IL-2受體(CD25)的基因錶達水平,應用Multiplex檢測技術測定培養上清液中IFIN-γ、IL-2、IL_4和IL-10的水平.結果 與正常CD4+細胞比較,加入RATG的CD4+細胞培養24 h,其CTLA-4、CD154、Foxp3、OX40、IFN-γ、IL-2、IL-10和CD25基因轉錄錶達均上調,陰性對照CD4+細胞則無這些基因轉錄錶達的上調.處理48 h後,CD4+細胞的CD154和IL-2的基因轉錄錶達呈現下調現象,而CTLA4、Foxp3、0X40、IFN-γ、IL-10和CD25的基因轉錄水平均較24 h時明顯降低.處理72 h後,CD4+細胞的CTLA4、Foxp3、OX40和CD25的基因轉錄錶達再次呈現高水平,CD154和IFN-γ的基因轉錄錶達上調錶達不明顯,而IL-2和IL-10的基因轉錄錶達則呈現明顯的下調.RATG處理的CD4+細胞培養上清液中的IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10濃度顯著增加,以處理24 h的水平最高,而陰性對照者未測齣.與正常CD8+細胞相比較,加入RATG處理的CD8+細胞培養24 h,其CTLA4、Foxp3、OX40、IFN-γ,、IL-2、IL-10和CD25的基因轉錄錶達呈現明顯上調,而CD154基因轉錄錶達稍有下調.RATG處理48 h,CD8+細胞的CTLA4、Foxp3、OX40、IFN-γ和CD25基因轉錄錶達仍維持在高水平,CD154基因轉錄錶達僅僅呈現低水平的上調,IL-10基因轉錄錶達水平顯著下降,而IL-2的基因轉錄錶達則明顯下調.處理72 h,CD8+細胞的CTLA4、Foxp3、OX40、IFN-γ、IL-10和CD25的基因轉錄錶達仍維持在高水平,CD154基因轉錄錶達則呈現下調,而IL-2基因轉錄錶達的下調更為顯著.陰性對照CD8+細胞則未呈現這些基因轉錄的上調現象.RATG處理的CD8+細胞培養上清液中IFN-γ、IL-2和IL-10顯著增多,以處理24 h的濃度最高,IL-4濃度升高的幅度較小,而正常CD8+細胞和陰性對照CD8+細胞幾乎檢測不到IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10.結論 在體外,RATG可以刺激CD4+細胞和CD8+細胞上調多種促進免疫抑製的共刺激分子基因錶達,促進其分泌與免疫調節相關的IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10.
목적 탐토토항인흉선세포다극륭항체(RATG)재체외대CD4+세포화CD8+세포공자격분자기인표체화세포인자분비적영향.방법 종정상성인외주혈단개핵세포중분리화순화CD4+세포화CD8+세포,가입RATG,37℃하배양.분별우24、48화72 h수집배양상청액화세포,이불처리적세포위정상대조,정상토Ig처리적세포작위음성대조.채용실시취합매련반응기술검측배양세포적세포독성T림파세포상관항원4(CTLA4)、CD154、Foxp3、OX40、γ간우소(IFN-γ)、백세포개소2(IL-2)、IL-10화IL-2수체(CD25)적기인표체수평,응용Multiplex검측기술측정배양상청액중IFIN-γ、IL-2、IL_4화IL-10적수평.결과 여정상CD4+세포비교,가입RATG적CD4+세포배양24 h,기CTLA-4、CD154、Foxp3、OX40、IFN-γ、IL-2、IL-10화CD25기인전록표체균상조,음성대조CD4+세포칙무저사기인전록표체적상조.처리48 h후,CD4+세포적CD154화IL-2적기인전록표체정현하조현상,이CTLA4、Foxp3、0X40、IFN-γ、IL-10화CD25적기인전록수평균교24 h시명현강저.처리72 h후,CD4+세포적CTLA4、Foxp3、OX40화CD25적기인전록표체재차정현고수평,CD154화IFN-γ적기인전록표체상조표체불명현,이IL-2화IL-10적기인전록표체칙정현명현적하조.RATG처리적CD4+세포배양상청액중적IFN-γ、IL-2、IL-4화IL-10농도현저증가,이처리24 h적수평최고,이음성대조자미측출.여정상CD8+세포상비교,가입RATG처리적CD8+세포배양24 h,기CTLA4、Foxp3、OX40、IFN-γ,、IL-2、IL-10화CD25적기인전록표체정현명현상조,이CD154기인전록표체초유하조.RATG처리48 h,CD8+세포적CTLA4、Foxp3、OX40、IFN-γ화CD25기인전록표체잉유지재고수평,CD154기인전록표체부부정현저수평적상조,IL-10기인전록표체수평현저하강,이IL-2적기인전록표체칙명현하조.처리72 h,CD8+세포적CTLA4、Foxp3、OX40、IFN-γ、IL-10화CD25적기인전록표체잉유지재고수평,CD154기인전록표체칙정현하조,이IL-2기인전록표체적하조경위현저.음성대조CD8+세포칙미정현저사기인전록적상조현상.RATG처리적CD8+세포배양상청액중IFN-γ、IL-2화IL-10현저증다,이처리24 h적농도최고,IL-4농도승고적폭도교소,이정상CD8+세포화음성대조CD8+세포궤호검측불도IFN-γ、IL-2、IL-4화IL-10.결론 재체외,RATG가이자격CD4+세포화CD8+세포상조다충촉진면역억제적공자격분자기인표체,촉진기분비여면역조절상관적IFN-γ、IL-2、IL-4화IL-10.
Objective To investigate the immunological effects of thymoglobulin (RATG) on human CD4+and CD8+cells for costimulatory molecule gene expression and the production ofimmune-regulatory cytokines. Methods CD4+and CI8+T cells were isolated and purified fromnormal human peripheral blood mononuclear cells (PBMC) followed by incubation with RATG at37℃. Cells and culture supematants were collected at 24, 48, and 72 h after incubation, and analyzedby real-time quantitative polymerase chain reaction (RT-PCR) for CTLA-4, CD154, forkhead box P3(Foxp3), OX40, IFN-γ, IL-2, IL-10 and CD25 gene expression, and multiplex cytokine detectionassay for IFN-y, IL-2, IL-10, and IL-4 production. Untreated and rabbit isotype Ig-treated cells wereused as negative controls. Results RT-PCR demonstrated that RATG pre-treated CI+and CD8+cells upregulated the expression of CTLA-4, OX40, Foxp3, CD25, IFN-γ, IL-10 and IL-2 genes, anda dramatic increase of supernatant IFN-γ, IL-10, IL-2 and IL-4 was revealed 24 h after treatment asdetermined by multiplex cytokine detection assay when compared with negative controls. Theupre gulation of CTLA-4, Foxp3, OX40, IL-10 and CD25 was reduced, and a down-regulation ofCD154 and IL-2 gene expression was revealed 48 h after treatment. Cells, treated with RATG for 72h, demonstrated up-regulation of CTLA-4, Foxp3, OX40, IFN-y and CD25 gene expression, and theexpression of IL-2 and IL-10 genes was down-regulated. Additionally, supernatant IFN-γ, IL-2,IL-10 and IL-4 levels were decreased. Conclusion RATG stimulates CI4/CD8 T cells to up-regulatecostimulatory molecules and release immune regulation associated cytokines IF'N-γ, IL-2, IL-10in vitro. These results suggest that the unique effect of RATG on CD4+CD8+T cells may be animportant mechanism for its action in inducing immunoregulation, immunosuppression and transplanttolerance.
