微生物学通报
微生物學通報
미생물학통보
MICROBIOLOGY
2007年
3期
475-478
,共4页
大肠杆菌O157%Vero毒素%重组质粒%融合表达%单克隆抗体
大腸桿菌O157%Vero毒素%重組質粒%融閤錶達%單剋隆抗體
대장간균O157%Vero독소%중조질립%융합표체%단극륭항체
以大肠杆菌O157 DNA为模板扩增VT2-B亚单位,纯化后经EcoRⅠ和Xho Ⅰ酶切,连入表达载体pGEX4T-2,构建重组表达质粒pGEX4T-2-VT2-B.转化到大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导,实现了VT2-B-GST融合蛋白的可溶性表达,表达量约占菌体总蛋白的35%.重组蛋白纯化后,免疫BALB/C小鼠制备单克隆抗体,得到2株融合细胞,制备了腹水单抗,测得单抗的ELISA效价为104.Western blot表明,该单抗能与重组蛋白特异性的结合.特异性单抗的获得为VT2毒素检测方法的建立奠定了基础.
以大腸桿菌O157 DNA為模闆擴增VT2-B亞單位,純化後經EcoRⅠ和Xho Ⅰ酶切,連入錶達載體pGEX4T-2,構建重組錶達質粒pGEX4T-2-VT2-B.轉化到大腸桿菌BL21中,經IPTG誘導,實現瞭VT2-B-GST融閤蛋白的可溶性錶達,錶達量約佔菌體總蛋白的35%.重組蛋白純化後,免疫BALB/C小鼠製備單剋隆抗體,得到2株融閤細胞,製備瞭腹水單抗,測得單抗的ELISA效價為104.Western blot錶明,該單抗能與重組蛋白特異性的結閤.特異性單抗的穫得為VT2毒素檢測方法的建立奠定瞭基礎.
이대장간균O157 DNA위모판확증VT2-B아단위,순화후경EcoRⅠ화Xho Ⅰ매절,련입표체재체pGEX4T-2,구건중조표체질립pGEX4T-2-VT2-B.전화도대장간균BL21중,경IPTG유도,실현료VT2-B-GST융합단백적가용성표체,표체량약점균체총단백적35%.중조단백순화후,면역BALB/C소서제비단극륭항체,득도2주융합세포,제비료복수단항,측득단항적ELISA효개위104.Western blot표명,해단항능여중조단백특이성적결합.특이성단항적획득위VT2독소검측방법적건립전정료기출.
