BARF1基因真核表达载体PIRES2-EGFP/BARF1的构建及鉴定
BARF1기인진핵표체재체PIRES2-EGFP/BARF1적구건급감정
Construction and identification of eukaryotic expression vector PIRES2-EGFP/BARF1 for BARF1 gene
  • 万方数据
    辽宁师范大学学报（自然科学版） 료녕사범대학학보（자연과학판）
    JOURNAL OF LIAONING NORMAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
    2011年 1期 98-101 ,共4页

    李淑英%张科%杜海军%王湛%李旭坤%慈雅丽%王新燕%张秀军%周玲

    리숙영%장과%두해군%왕담%리욱곤%자아려%왕신연%장수군%주령

    EB病毒%BARF1基因%真核表达载体 EB病毒%BARF1基因%真覈錶達載體
    EB병독%BARF1기인%진핵표체재체
    提取B95-8细胞RNA,进行逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增BARF1基因,将其克隆到pUM-T载体,转化E.coli DH5α.筛选阳性克隆,提取质粒并用EcoRI和BamHI双酶切,电泳回收BARF1片段.同时用EcoRI和BamHI双酶切真核载体PIRES2-EGFP,电泳后回收载体PIRES2-EGFP并与BARF1片段连接;转化E.coli DH5α,筛选阳性克隆.提取质粒并用EcoRI和BamHI双酶切鉴定插入方向,并进行测序分析.转染胃上皮细服GES-1后,观察细胞形态与行为变化.得到666 by的BARF1基因片段.经双酶切鉴定,BARF1基因已正确连接到PIRES2-EGFP真核表达载体;侧序结果与B95-8细胞株序列完全一致.BARF1基因转染GES-1细胞后,细胞由梭形圆化,黏着力减弱,重叠生长.结果表明成功地构建了携带EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)编码BARF1基因的真核表达载体.
    제취B95-8세포RNA,진행역전록취합매련반응(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)확증BARF1기인,장기극륭도pUM-T재체,전화E.coli DH5α.사선양성극륭,제취질립병용EcoRI화BamHI쌍매절,전영회수BARF1편단.동시용EcoRI화BamHI쌍매절진핵재체PIRES2-EGFP,전영후회수재체PIRES2-EGFP병여BARF1편단련접;전화E.coli DH5α,사선양성극륭.제취질립병용EcoRI화BamHI쌍매절감정삽입방향,병진행측서분석.전염위상피세복GES-1후,관찰세포형태여행위변화.득도666 by적BARF1기인편단.경쌍매절감정,BARF1기인이정학련접도PIRES2-EGFP진핵표체재체;측서결과여B95-8세포주서렬완전일치.BARF1기인전염GES-1세포후,세포유사형원화,점착력감약,중첩생장.결과표명성공지구건료휴대EB병독(Epstein-Barr virus,EBV)편마BARF1기인적진핵표체재체.
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