中国农业科技导报
中國農業科技導報
중국농업과기도보
REVIEW OF CHINA AGRICULTURAL SCIENCE AND TECHNOLOGY
2011年
3期
53-59
,共7页
章沙沙%张宇宏%樊晓虎%刘素纯%刘仲华%张伟
章沙沙%張宇宏%樊曉虎%劉素純%劉仲華%張偉
장사사%장우굉%번효호%류소순%류중화%장위
乳杆菌%乳糖酶%β-半乳糖苷酶%基因表达
乳桿菌%乳糖酶%β-半乳糖苷酶%基因錶達
유간균%유당매%β-반유당감매%기인표체
采用简并引物PCR和TAIL-PCR方法,从乳杆菌Lactobacilus sp.B164中克隆得到一个乳糖酶基因bg42-164.基因全长2 031 bp,编码676个氨基酸和一个终止密码子,预测分子量76 kDa,无信号肽序列.将bg42-164连接pET-30a(+)载体并转入大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后可检测到乳糖酶活力.SDS-PAGE分析乳糖酶BG42-164的蛋白分子量为76 kDa,使用组氨酸标签亲和层析方法进行蛋白纯化,并对纯化的乳糖酶BG42-l64进行了酶学性质分析.该酶最适反应温度为50℃,经50℃处理30 min后,剩余酶活力保留80%以上,pH 6.0时该酶的水解活力最高.牛奶水解试验表明,乳糖酶BG42-l64对乳糖的水解效果良好,5 mL牛奶中添加250 U酶蛋白,在50℃条件下2 h乳糖水解率为100%.该酶温度范围宽,乳糖水解效果好,为其在低乳糖奶生产中应用奠定了理论基础.
採用簡併引物PCR和TAIL-PCR方法,從乳桿菌Lactobacilus sp.B164中剋隆得到一箇乳糖酶基因bg42-164.基因全長2 031 bp,編碼676箇氨基痠和一箇終止密碼子,預測分子量76 kDa,無信號肽序列.將bg42-164連接pET-30a(+)載體併轉入大腸桿菌BL21(DE3),經IPTG誘導錶達後可檢測到乳糖酶活力.SDS-PAGE分析乳糖酶BG42-164的蛋白分子量為76 kDa,使用組氨痠標籤親和層析方法進行蛋白純化,併對純化的乳糖酶BG42-l64進行瞭酶學性質分析.該酶最適反應溫度為50℃,經50℃處理30 min後,剩餘酶活力保留80%以上,pH 6.0時該酶的水解活力最高.牛奶水解試驗錶明,乳糖酶BG42-l64對乳糖的水解效果良好,5 mL牛奶中添加250 U酶蛋白,在50℃條件下2 h乳糖水解率為100%.該酶溫度範圍寬,乳糖水解效果好,為其在低乳糖奶生產中應用奠定瞭理論基礎.
채용간병인물PCR화TAIL-PCR방법,종유간균Lactobacilus sp.B164중극륭득도일개유당매기인bg42-164.기인전장2 031 bp,편마676개안기산화일개종지밀마자,예측분자량76 kDa,무신호태서렬.장bg42-164련접pET-30a(+)재체병전입대장간균BL21(DE3),경IPTG유도표체후가검측도유당매활력.SDS-PAGE분석유당매BG42-164적단백분자량위76 kDa,사용조안산표첨친화층석방법진행단백순화,병대순화적유당매BG42-l64진행료매학성질분석.해매최괄반응온도위50℃,경50℃처리30 min후,잉여매활력보류80%이상,pH 6.0시해매적수해활력최고.우내수해시험표명,유당매BG42-l64대유당적수해효과량호,5 mL우내중첨가250 U매단백,재50℃조건하2 h유당수해솔위100%.해매온도범위관,유당수해효과호,위기재저유당내생산중응용전정료이론기출.
