CAJ | 학술논문

目的:初步探讨长期培养的CIK细胞hTERT基因表达水平的变化,进一步评价CIK细胞治疗的安全性.方法:抽取3名健康人外周静脉血进行CIK细胞培养,每周台盼蓝染色计数细胞,实时荧光定量PCR法检测培养第0、2、7、21及42天的CIK细胞hTERT基因的表达水平,流式细胞仪分析培养第0、7、14、28、49及56天的CIK细胞周期的改变并检测凋亡,MTT法测定培养第14、30天的CIK细胞对肺癌LTE细胞系的细胞毒活性.结果:CIK细胞在体外培养第28天至第35天细胞增殖达高峰,与第0天相比扩增约6.7至15.95倍,此后存活细胞逐渐减少,最终约60天左右细胞全部死亡,与流式细胞仪检测细胞凋亡结果一致.hTERT表达水平在培养48小时最高,较第0天增加约(2.84±1.27)倍,随后随培养时间延长表达水平下降,在培养1周时降至培养初始水平,并在此后的培养过程中维持低水平表达.在CIK培养1周时处于S期细胞比例最高,约(41.27±4.57)％,随培养时间延长Go/G1期细胞比例占绝大部分,在培养第49天Go/G1期细胞比例在90％以上[(97.56±1.17)％]；CIK细胞在第14天杀瘤活性约(58.58±8.52)％,在30天时杀瘤活性明显下降,约(32.47±7.51)％.结论:长期培养的CIK细胞随培养时间延长hTERT表达水平下降,未见细胞永生化倾向.
목적:초보탐토장기배양적CIK세포hTERT기인표체수평적변화,진일보평개CIK세포치료적안전성.방법:추취3명건강인외주정맥혈진행CIK세포배양,매주태반람염색계수세포,실시형광정량PCR법검측배양제0、2、7、21급42천적CIK세포hTERT기인적표체수평,류식세포의분석배양제0、7、14、28、49급56천적CIK세포주기적개변병검측조망,MTT법측정배양제14、30천적CIK세포대폐암LTE세포계적세포독활성.결과:CIK세포재체외배양제28천지제35천세포증식체고봉,여제0천상비확증약6.7지15.95배,차후존활세포축점감소,최종약60천좌우세포전부사망,여류식세포의검측세포조망결과일치.hTERT표체수평재배양48소시최고,교제0천증가약(2.84±1.27)배,수후수배양시간연장표체수평하강,재배양1주시강지배양초시수평,병재차후적배양과정중유지저수평표체.재CIK배양1주시처우S기세포비례최고,약(41.27±4.57)％,수배양시간연장Go/G1기세포비례점절대부분,재배양제49천Go/G1기세포비례재90％이상[(97.56±1.17)％]；CIK세포재제14천살류활성약(58.58±8.52)％,재30천시살류활성명현하강,약(32.47±7.51)％.결론:장기배양적CIK세포수배양시간연장hTERT표체수평하강,미견세포영생화경향.