实用儿科临床杂志
實用兒科臨床雜誌
실용인과림상잡지
Journal of Applied Clinical Pediatrics
2009年
23期
1845-1847
,共3页
翟溯澜%张沙沙%赵钟钟%钱辉%张朝
翟溯瀾%張沙沙%趙鐘鐘%錢輝%張朝
적소란%장사사%조종종%전휘%장조
胚胎心脏%多克隆抗体%小鼠
胚胎心髒%多剋隆抗體%小鼠
배태심장%다극륭항체%소서
目的 制备针对胚胎小鼠心肌L型钙通道Cav1.3编码的α1D亚基胞内末端的多克隆抗体.方法 通过基因重组从小鼠胚胎心脏中获得2种原核表达质粒pGEX-4T-α1DN/α1DC,在大肠杆菌中经异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达谷胱甘肽S转移酶(GST)融合蛋白,纯化得到α1D基因N端和C端产物GST-α1DN/α1DC,用此抗原经弗式佐剂、弗式不完全佐剂乳化后免疫新西兰家兔,收集的免疫血清经protein G Agarose亲和纯化后获得IgG型抗α1D蛋白的多克隆抗体.对这2种抗体采用Westernblot法进行特异性检测,ELISA法测定进行效价分析.结果 成功构建α1D胞内片段的原核表达载体,表达纯化了GST融合蛋白GST-α1DC/α1DN,制备2种IgG型多克降抗体,经ELISA检验证实二者效价均较高,滴度在1:256 000时仍有信号,其中GST-α1DN的效价更高.用Western blot法检测发现,2种抗体都均在相对分子质量240 000处得到单一的蛋白印迹条带.特异性良好,能识别小鼠心肌细胞中α1D蛋白.结论 用重组融合蛋白GST-α1D作为抗原制备出了具有高效价、强特异性的α1D抗体,为探讨α1D蛋白在小鼠胚胎心脏发育过程中分布的时空特征及研究胚胎发育过程中的钙离子相关信号调控活动奠定了基础.
目的 製備針對胚胎小鼠心肌L型鈣通道Cav1.3編碼的α1D亞基胞內末耑的多剋隆抗體.方法 通過基因重組從小鼠胚胎心髒中穫得2種原覈錶達質粒pGEX-4T-α1DN/α1DC,在大腸桿菌中經異丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)誘導錶達穀胱甘肽S轉移酶(GST)融閤蛋白,純化得到α1D基因N耑和C耑產物GST-α1DN/α1DC,用此抗原經弗式佐劑、弗式不完全佐劑乳化後免疫新西蘭傢兔,收集的免疫血清經protein G Agarose親和純化後穫得IgG型抗α1D蛋白的多剋隆抗體.對這2種抗體採用Westernblot法進行特異性檢測,ELISA法測定進行效價分析.結果 成功構建α1D胞內片段的原覈錶達載體,錶達純化瞭GST融閤蛋白GST-α1DC/α1DN,製備2種IgG型多剋降抗體,經ELISA檢驗證實二者效價均較高,滴度在1:256 000時仍有信號,其中GST-α1DN的效價更高.用Western blot法檢測髮現,2種抗體都均在相對分子質量240 000處得到單一的蛋白印跡條帶.特異性良好,能識彆小鼠心肌細胞中α1D蛋白.結論 用重組融閤蛋白GST-α1D作為抗原製備齣瞭具有高效價、彊特異性的α1D抗體,為探討α1D蛋白在小鼠胚胎心髒髮育過程中分佈的時空特徵及研究胚胎髮育過程中的鈣離子相關信號調控活動奠定瞭基礎.
목적 제비침대배태소서심기L형개통도Cav1.3편마적α1D아기포내말단적다극륭항체.방법 통과기인중조종소서배태심장중획득2충원핵표체질립pGEX-4T-α1DN/α1DC,재대장간균중경이병기-β-D류대반유당감(IPTG)유도표체곡광감태S전이매(GST)융합단백,순화득도α1D기인N단화C단산물GST-α1DN/α1DC,용차항원경불식좌제、불식불완전좌제유화후면역신서란가토,수집적면역혈청경protein G Agarose친화순화후획득IgG형항α1D단백적다극륭항체.대저2충항체채용Westernblot법진행특이성검측,ELISA법측정진행효개분석.결과 성공구건α1D포내편단적원핵표체재체,표체순화료GST융합단백GST-α1DC/α1DN,제비2충IgG형다극강항체,경ELISA검험증실이자효개균교고,적도재1:256 000시잉유신호,기중GST-α1DN적효개경고.용Western blot법검측발현,2충항체도균재상대분자질량240 000처득도단일적단백인적조대.특이성량호,능식별소서심기세포중α1D단백.결론 용중조융합단백GST-α1D작위항원제비출료구유고효개、강특이성적α1D항체,위탐토α1D단백재소서배태심장발육과정중분포적시공특정급연구배태발육과정중적개리자상관신호조공활동전정료기출.
