CAJ | 학술논문

通过二次正交旋转组合设计对尾叶桉叶盘愈伤组织分化培养基优化,获得尾叶桉(Eucalyptus urophylia)叶盘外植体的再生植株.将携带外源目的基因的根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)与尾叶桉U6无性系叶盘共培养,经愈伤组织诱导、卡那霉素筛选和植株再生,获得20个小芽,再将小芽转入附加卡那霉素(Kam)40μg\5mL-1的E3-B培养基中诱根,获得8株存活且可再生的转化子.取转化苗叶片作胭脂碱合成酶活性检测电泳后呈阳性;分别以γ-32p-dCTP及地高辛标记柞蚕抗菌肽D基因作探针,与转化苗DNA作点杂交及Southern印迹杂交检测,结果均呈阳性.以上结果表明,柞蚕抗菌肽D基因已整合到尾叶桉基因组中.将从桉树青枯病重病区分离的强毒青枯菌(Pseudomonas spp.)株(991016)以1×109cfu\5mL-1浓度接种转化试管苗,以未经转基因的尾叶桉U6无性系试管苗为对照,结果表明转化苗接种死亡率56.7%,对照死亡率为86.7%,由此可推出导入柞蚕抗菌肽D基因的尾叶桉转化苗明显提高了对青枯菌的抗性.
통과이차정교선전조합설계대미협안협반유상조직분화배양기우화,획득미협안(Eucalyptus urophylia)협반외식체적재생식주.장휴대외원목적기인적근암농간균(Agrobacterium tumefaciens)여미협안U6무성계협반공배양,경유상조직유도、잡나매소사선화식주재생,획득20개소아,재장소아전입부가잡나매소(Kam)40μg\5mL-1적E3-B배양기중유근,획득8주존활차가재생적전화자.취전화묘협편작연지감합성매활성검측전영후정양성;분별이γ-32p-dCTP급지고신표기작잠항균태D기인작탐침,여전화묘DNA작점잡교급Southern인적잡교검측,결과균정양성.이상결과표명,작잠항균태D기인이정합도미협안기인조중.장종안수청고병중병구분리적강독청고균(Pseudomonas spp.)주(991016)이1×109cfu\5mL-1농도접충전화시관묘,이미경전기인적미협안U6무성계시관묘위대조,결과표명전화묘접충사망솔56.7%,대조사망솔위86.7%,유차가추출도입작잠항균태D기인적미협안전화묘명현제고료대청고균적항성.