浙江大学学报(农业与生命科学版)
浙江大學學報(農業與生命科學版)
절강대학학보(농업여생명과학판)
2002年
3期
303-306
,共4页
程丽琴%周继勇%沈行燕%陈吉刚%陈声明
程麗琴%週繼勇%瀋行燕%陳吉剛%陳聲明
정려금%주계용%침행연%진길강%진성명
鸡传染性支气管炎病毒%RT-PCR%S基因%克隆%序列分析
鷄傳染性支氣管炎病毒%RT-PCR%S基因%剋隆%序列分析
계전염성지기관염병독%RT-PCR%S기인%극륭%서렬분석
将含有鸡传染性支气管炎病毒(IBV)H52毒株的尿囊液浓缩,用TRIzol 试剂抽提病毒RNA作为反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的模板,参照已发表的IBV-Beaudette 株S基因序列,设计并合成一对特异性引物,扩增得到长度约3.6 kb 的S基因片段,利用引物设计中EcoR I和BamH I 酶切位点插入到克隆载体pBlueScript SK 的多克隆位点中,转化感受态E.coli DH5α.经酶切分析和PCR等方法鉴定,筛选出阳性克隆,进行核苷酸序列测定,证实获得了S 基因的全长序列.利用DNAstar等分析软件与GenBank中其它IBV毒株的核苷酸及其推导的氨基酸进行序列同源性比较分析,结果表明,H52毒株与已报道的核苷酸的同源性在83.45%～99.71%之间,氨基酸的同源性在82.10%～99.26%之间.
將含有鷄傳染性支氣管炎病毒(IBV)H52毒株的尿囊液濃縮,用TRIzol 試劑抽提病毒RNA作為反轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)的模闆,參照已髮錶的IBV-Beaudette 株S基因序列,設計併閤成一對特異性引物,擴增得到長度約3.6 kb 的S基因片段,利用引物設計中EcoR I和BamH I 酶切位點插入到剋隆載體pBlueScript SK 的多剋隆位點中,轉化感受態E.coli DH5α.經酶切分析和PCR等方法鑒定,篩選齣暘性剋隆,進行覈苷痠序列測定,證實穫得瞭S 基因的全長序列.利用DNAstar等分析軟件與GenBank中其它IBV毒株的覈苷痠及其推導的氨基痠進行序列同源性比較分析,結果錶明,H52毒株與已報道的覈苷痠的同源性在83.45%～99.71%之間,氨基痠的同源性在82.10%～99.26%之間.
장함유계전염성지기관염병독(IBV)H52독주적뇨낭액농축,용TRIzol 시제추제병독RNA작위반전록-취합매련반응(RT-PCR)적모판,삼조이발표적IBV-Beaudette 주S기인서렬,설계병합성일대특이성인물,확증득도장도약3.6 kb 적S기인편단,이용인물설계중EcoR I화BamH I 매절위점삽입도극륭재체pBlueScript SK 적다극륭위점중,전화감수태E.coli DH5α.경매절분석화PCR등방법감정,사선출양성극륭,진행핵감산서렬측정,증실획득료S 기인적전장서렬.이용DNAstar등분석연건여GenBank중기타IBV독주적핵감산급기추도적안기산진행서렬동원성비교분석,결과표명,H52독주여이보도적핵감산적동원성재83.45%～99.71%지간,안기산적동원성재82.10%～99.26%지간.
