中国输血杂志
中國輸血雜誌
중국수혈잡지
CHINESE JOURNAL OF BLOOD TRANSFUSION
2005年
4期
275-279
,共5页
高跞%范华骅%陆华中%聂晓绚%龚裕春%刘嬿%高峰
高躒%範華驊%陸華中%聶曉絢%龔裕春%劉嬿%高峰
고력%범화화%륙화중%섭효현%공유춘%류연%고봉
树突状细胞%K562细胞%RNA%转染%T淋巴细胞%细胞毒%培养
樹突狀細胞%K562細胞%RNA%轉染%T淋巴細胞%細胞毒%培養
수돌상세포%K562세포%RNA%전염%T림파세포%세포독%배양
目的探讨人的树突状细胞(dendritic cell, DC)体外经K562细胞株总RNA转染后,能否诱导出p210蛋白表达,并诱导特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL).方法自健康人浓缩白细胞制品(白膜)分离有粘附特性的单核细胞(PBMC),经GM-CSF、IL-4培养5d后,获得未成熟的DC(imature DC,imDC);体外以脂质体DOTAP或直接电穿孔转染K562细胞总RNA.抽提转染前后以及转染24h后的DC内RNA 进行RT-PCR检测,Western-blot分析p210蛋白表达,以及诱导CTL杀伤K562细胞功能检测等.PBMC以每组5×106/ml,分别在不同组分的培养液中培养DC,通过细胞计数、流式细胞仪测定CD1a表达、细胞纯度来估计制备效果.结果 RT-PCR检测表明:DC经K562总RNA转染后,细胞内出现Bcr-Abl的cDNA条带,24h后消失.Western-blot试验表明:转染24h后,开始表达p210特征性蛋白;并且明显促进T细胞对K562的杀伤活性.1%自体血浆体积分数RPMI 1640培养的DC的CD1a表达量最高,并且细胞获得数量也仅屈居第二,为总体评价较高的一组.结论应用肿瘤总RNA负载DC来制备DC疫苗具有可行性,预示改良的DC疫苗抗肿瘤的广泛应用前景.
目的探討人的樹突狀細胞(dendritic cell, DC)體外經K562細胞株總RNA轉染後,能否誘導齣p210蛋白錶達,併誘導特異性細胞毒T淋巴細胞(CTL).方法自健康人濃縮白細胞製品(白膜)分離有粘附特性的單覈細胞(PBMC),經GM-CSF、IL-4培養5d後,穫得未成熟的DC(imature DC,imDC);體外以脂質體DOTAP或直接電穿孔轉染K562細胞總RNA.抽提轉染前後以及轉染24h後的DC內RNA 進行RT-PCR檢測,Western-blot分析p210蛋白錶達,以及誘導CTL殺傷K562細胞功能檢測等.PBMC以每組5×106/ml,分彆在不同組分的培養液中培養DC,通過細胞計數、流式細胞儀測定CD1a錶達、細胞純度來估計製備效果.結果 RT-PCR檢測錶明:DC經K562總RNA轉染後,細胞內齣現Bcr-Abl的cDNA條帶,24h後消失.Western-blot試驗錶明:轉染24h後,開始錶達p210特徵性蛋白;併且明顯促進T細胞對K562的殺傷活性.1%自體血漿體積分數RPMI 1640培養的DC的CD1a錶達量最高,併且細胞穫得數量也僅屈居第二,為總體評價較高的一組.結論應用腫瘤總RNA負載DC來製備DC疫苗具有可行性,預示改良的DC疫苗抗腫瘤的廣汎應用前景.
목적탐토인적수돌상세포(dendritic cell, DC)체외경K562세포주총RNA전염후,능부유도출p210단백표체,병유도특이성세포독T림파세포(CTL).방법자건강인농축백세포제품(백막)분리유점부특성적단핵세포(PBMC),경GM-CSF、IL-4배양5d후,획득미성숙적DC(imature DC,imDC);체외이지질체DOTAP혹직접전천공전염K562세포총RNA.추제전염전후이급전염24h후적DC내RNA 진행RT-PCR검측,Western-blot분석p210단백표체,이급유도CTL살상K562세포공능검측등.PBMC이매조5×106/ml,분별재불동조분적배양액중배양DC,통과세포계수、류식세포의측정CD1a표체、세포순도래고계제비효과.결과 RT-PCR검측표명:DC경K562총RNA전염후,세포내출현Bcr-Abl적cDNA조대,24h후소실.Western-blot시험표명:전염24h후,개시표체p210특정성단백;병차명현촉진T세포대K562적살상활성.1%자체혈장체적분수RPMI 1640배양적DC적CD1a표체량최고,병차세포획득수량야부굴거제이,위총체평개교고적일조.결론응용종류총RNA부재DC래제비DC역묘구유가행성,예시개량적DC역묘항종류적엄범응용전경.
