CAJ | 학술논문

目的建立一种检测日本血吸虫感染的胶体金免疫层析方法.方法将已获得的单抗用protein-G亲和层析纯化,通过间接ELISA测定每株单抗的亲和常数.按改良过碘酸钠标记法,8株单抗标记辣根过氧化物酶(HRP)后进行不同株单抗配对,选出亲和力高、稳定性强的单抗配对组合.胶体金标记4株抗体,选择最佳反应模式,建立胶体金免疫层析方法,并对弓形虫感染鼠血样、血吸虫感染前和感染后2、3、4、5、6周的鼠血样进行检测.结果 8株抗SjP38单克隆抗体经纯化后纯度达95%以上,其亲和常数介于1×10-8mol/L～2.82×10-10mol/L.根据配对实验,1A6与9H6、1A6与9G7、6G12与9H6、6G12与9G7以及9H6与9G7为最佳配对组合.标记1A6、6G12、9H6与9G7这4株单抗后筛选出最佳反应模式,即以9G7为包被抗体,包被浓度为2.5μg/μl;当1A6为金标抗体,抗体稀释浓度为1:4时,检测效果最佳.对rSjp38的最低检测量为12.5 ng/ml.抗检测感染3、4、5、6周小鼠血清,阳性率分别为40%、50%、60%、80%,而弓形虫感染鼠和血吸虫感染前小鼠血样的检测结果为100%阴性.结论通过抗体配对、最佳包被量和金标抗体稀释倍数条件的优化,建立了快速、简便、特异的胶体金免疫层析方法,自制的rSjP38试纸条能检测血吸虫早期感染鼠血清中的循环抗原SjP38.
목적건립일충검측일본혈흡충감염적효체금면역층석방법.방법장이획득적단항용protein-G친화층석순화,통과간접ELISA측정매주단항적친화상수.안개량과전산납표기법,8주단항표기랄근과양화물매(HRP)후진행불동주단항배대,선출친화력고、은정성강적단항배대조합.효체금표기4주항체,선택최가반응모식,건립효체금면역층석방법,병대궁형충감염서혈양、혈흡충감염전화감염후2、3、4、5、6주적서혈양진행검측.결과 8주항SjP38단극륭항체경순화후순도체95%이상,기친화상수개우1×10-8mol/L～2.82×10-10mol/L.근거배대실험,1A6여9H6、1A6여9G7、6G12여9H6、6G12여9G7이급9H6여9G7위최가배대조합.표기1A6、6G12、9H6여9G7저4주단항후사선출최가반응모식,즉이9G7위포피항체,포피농도위2.5μg/μl;당1A6위금표항체,항체희석농도위1:4시,검측효과최가.대rSjp38적최저검측량위12.5 ng/ml.항검측감염3、4、5、6주소서혈청,양성솔분별위40%、50%、60%、80%,이궁형충감염서화혈흡충감염전소서혈양적검측결과위100%음성.결론통과항체배대、최가포피량화금표항체희석배수조건적우화,건립료쾌속、간편、특이적효체금면역층석방법,자제적rSjP38시지조능검측혈흡충조기감염서혈청중적순배항원SjP38.