中国动脉硬化杂志
中國動脈硬化雜誌
중국동맥경화잡지
CHINESE JOURNAL OF ARTERIOSCLEROSIS
2007年
7期
484-486
,共3页
吴孟津%王佐%姚峰%李国华%危当恒%唐朝克%姜志胜
吳孟津%王佐%姚峰%李國華%危噹恆%唐朝剋%薑誌勝
오맹진%왕좌%요봉%리국화%위당항%당조극%강지성
病理学与病理生理学%基质细胞衍生因子%粘附%单核细胞%细胞计数%人脐静脉内皮细胞
病理學與病理生理學%基質細胞衍生因子%粘附%單覈細胞%細胞計數%人臍靜脈內皮細胞
병이학여병리생이학%기질세포연생인자%점부%단핵세포%세포계수%인제정맥내피세포
目的 构建稳定表达基质细胞衍生因子1α的ECV304细胞系,研究基质细胞衍生因子1α在单核细胞/内皮细胞粘附中的作用.方法 将大鼠基质细胞衍生因子1α基因聚合酶链反应产物及质粒载体pcDNA3.1用EcoRⅠ进行酶切,去磷酸化,置于连接反应体系中进行连接,将连接产物氯化钙法转化DH5α菌.氨苄青霉素筛选并扩增阳性菌落,经酶切鉴定插入方向正确后,再用G418筛选、逆转录聚合酶链反应检测基质细胞衍生因子1α浓度,建立稳定转染ECV304细胞系.在6孔板上种植转染基质细胞衍生因子1α基因的ECV304细胞,加THP-1细胞37℃孵育30 min,磷酸缓冲液轻洗3遍,去除未粘附细胞,倒置显微镜下计数上、下、左、右、中5个视野,取其平均值得到每个视野粘附单核细胞数.结果 经逆转录聚合酶链反应检测证实,稳定表达基质细胞衍生因子1α的ECV304细胞系构建成功,细胞计数表明,转染ECV304细胞系粘附THP-1细胞数是转染空质粒的十几倍,CXCR4单抗基质细胞衍生因子1α多抗均显著减少其粘附力(P＜0.01).结论 内源性基质细胞衍生因子1α能促进ECV304细胞与单核细胞的粘附.
目的 構建穩定錶達基質細胞衍生因子1α的ECV304細胞繫,研究基質細胞衍生因子1α在單覈細胞/內皮細胞粘附中的作用.方法 將大鼠基質細胞衍生因子1α基因聚閤酶鏈反應產物及質粒載體pcDNA3.1用EcoRⅠ進行酶切,去燐痠化,置于連接反應體繫中進行連接,將連接產物氯化鈣法轉化DH5α菌.氨芐青黴素篩選併擴增暘性菌落,經酶切鑒定插入方嚮正確後,再用G418篩選、逆轉錄聚閤酶鏈反應檢測基質細胞衍生因子1α濃度,建立穩定轉染ECV304細胞繫.在6孔闆上種植轉染基質細胞衍生因子1α基因的ECV304細胞,加THP-1細胞37℃孵育30 min,燐痠緩遲液輕洗3遍,去除未粘附細胞,倒置顯微鏡下計數上、下、左、右、中5箇視野,取其平均值得到每箇視野粘附單覈細胞數.結果 經逆轉錄聚閤酶鏈反應檢測證實,穩定錶達基質細胞衍生因子1α的ECV304細胞繫構建成功,細胞計數錶明,轉染ECV304細胞繫粘附THP-1細胞數是轉染空質粒的十幾倍,CXCR4單抗基質細胞衍生因子1α多抗均顯著減少其粘附力(P＜0.01).結論 內源性基質細胞衍生因子1α能促進ECV304細胞與單覈細胞的粘附.
목적 구건은정표체기질세포연생인자1α적ECV304세포계,연구기질세포연생인자1α재단핵세포/내피세포점부중적작용.방법 장대서기질세포연생인자1α기인취합매련반응산물급질립재체pcDNA3.1용EcoRⅠ진행매절,거린산화,치우련접반응체계중진행련접,장련접산물록화개법전화DH5α균.안변청매소사선병확증양성균락,경매절감정삽입방향정학후,재용G418사선、역전록취합매련반응검측기질세포연생인자1α농도,건립은정전염ECV304세포계.재6공판상충식전염기질세포연생인자1α기인적ECV304세포,가THP-1세포37℃부육30 min,린산완충액경세3편,거제미점부세포,도치현미경하계수상、하、좌、우、중5개시야,취기평균치득도매개시야점부단핵세포수.결과 경역전록취합매련반응검측증실,은정표체기질세포연생인자1α적ECV304세포계구건성공,세포계수표명,전염ECV304세포계점부THP-1세포수시전염공질립적십궤배,CXCR4단항기질세포연생인자1α다항균현저감소기점부력(P＜0.01).결론 내원성기질세포연생인자1α능촉진ECV304세포여단핵세포적점부.
