中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2008年
4期
352-355
,共4页
黎村艳%张艳%刘志杰%余敏君%于文
黎村豔%張豔%劉誌傑%餘敏君%于文
려촌염%장염%류지걸%여민군%우문
幽门螺杆菌%空泡毒素%巨噬细胞%凋亡
幽門螺桿菌%空泡毒素%巨噬細胞%凋亡
유문라간균%공포독소%거서세포%조망
目的 构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)空泡毒素(Vacuolating cytotoxin,VacA)基因的真核表达载体pDsRed-Monomer-C1/vacA,并在THP-1巨噬细胞中表达,为研究VacA单一毒力决定簇的致病性奠定实验基础.方法 用Primer 5.0软件设计引物,以HP基因组为模板,PCR扩增vacA目的基因片段,克隆入真核表达载体pDsRed-Monomer-C1中,经酶切、PCR鉴定及测序鉴定后,转染 THP-1巨噬细胞中,荧光显微镜和Western-blot检测VacA蛋白在细胞中的表达;电镜观察巨噬细胞(MΦ)的空泡样变和凋亡;流式细胞仪检测细胞的凋亡率.结果 PCR扩增得到了大小约为1 428bp的目的片段,双酶切及测序鉴定证明成功构建了HP真核表达重组载体;转染后24h,重组质粒组部分细胞中有聚集的荧光颗粒,部分细胞发生空泡样变和凋亡改变;细胞凋亡率明显高于空质粒组和阴性对照组(P＜0.001),细胞核因子-κB(nuclear factor kappaB,NF-κB)的抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)抑制细胞的凋亡.结论 VacA蛋白瞬时高表达促进THP-1巨噬细胞空泡样变和凋亡.NF-κB可能参与调节VacA诱导的巨噬细胞凋亡.
目的 構建幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,HP)空泡毒素(Vacuolating cytotoxin,VacA)基因的真覈錶達載體pDsRed-Monomer-C1/vacA,併在THP-1巨噬細胞中錶達,為研究VacA單一毒力決定簇的緻病性奠定實驗基礎.方法 用Primer 5.0軟件設計引物,以HP基因組為模闆,PCR擴增vacA目的基因片段,剋隆入真覈錶達載體pDsRed-Monomer-C1中,經酶切、PCR鑒定及測序鑒定後,轉染 THP-1巨噬細胞中,熒光顯微鏡和Western-blot檢測VacA蛋白在細胞中的錶達;電鏡觀察巨噬細胞(MΦ)的空泡樣變和凋亡;流式細胞儀檢測細胞的凋亡率.結果 PCR擴增得到瞭大小約為1 428bp的目的片段,雙酶切及測序鑒定證明成功構建瞭HP真覈錶達重組載體;轉染後24h,重組質粒組部分細胞中有聚集的熒光顆粒,部分細胞髮生空泡樣變和凋亡改變;細胞凋亡率明顯高于空質粒組和陰性對照組(P＜0.001),細胞覈因子-κB(nuclear factor kappaB,NF-κB)的抑製劑二硫代氨基甲痠吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)抑製細胞的凋亡.結論 VacA蛋白瞬時高錶達促進THP-1巨噬細胞空泡樣變和凋亡.NF-κB可能參與調節VacA誘導的巨噬細胞凋亡.
목적 구건유문라간균(Helicobacter pylori,HP)공포독소(Vacuolating cytotoxin,VacA)기인적진핵표체재체pDsRed-Monomer-C1/vacA,병재THP-1거서세포중표체,위연구VacA단일독력결정족적치병성전정실험기출.방법 용Primer 5.0연건설계인물,이HP기인조위모판,PCR확증vacA목적기인편단,극륭입진핵표체재체pDsRed-Monomer-C1중,경매절、PCR감정급측서감정후,전염 THP-1거서세포중,형광현미경화Western-blot검측VacA단백재세포중적표체;전경관찰거서세포(MΦ)적공포양변화조망;류식세포의검측세포적조망솔.결과 PCR확증득도료대소약위1 428bp적목적편단,쌍매절급측서감정증명성공구건료HP진핵표체중조재체;전염후24h,중조질립조부분세포중유취집적형광과립,부분세포발생공포양변화조망개변;세포조망솔명현고우공질립조화음성대조조(P＜0.001),세포핵인자-κB(nuclear factor kappaB,NF-κB)적억제제이류대안기갑산필각완(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)억제세포적조망.결론 VacA단백순시고표체촉진THP-1거서세포공포양변화조망.NF-κB가능삼여조절VacA유도적거서세포조망.
