CAJ | 학술논문

背景:目前在胚胎多潜能干细胞建系和培养过程中,存在着建系率低、具有正常核型的干细胞系比率低等问题.目的:观察接种于人子宫内膜成纤维细胞饲养层上原代培养的人原始生殖细胞在体内外的生物学特性.设计、时间及地点:细胞观察,于2004-01/2005-04在沈阳市妇婴医院和中国医科大学完成.材料:人胚胎来源于流产孕妇,用于分离培养原始生殖细胞.人子宫内膜来源于因子宫肌瘤行子宫切除术的患者,用于制备成纤维细胞饲养层.清洁级10周龄雄性裸鼠2只,用于体内分化实验.方法:从人胚胎生殖嵴、肠系膜中消化分离的原始生殖细胞,将其接种在人子宫内膜成纤维细胞饲养层上传代培养.体内实验取连续传5代的2个细胞株,分别制备浓度为1×109 L-1的细胞悬液,于每只小鼠两侧腹股沟处皮下各接种0.5 mL,培养8周.体外分化采用无黏附特性的培养瓶和除去白血病抑制因子的原始牛殖细胞培养液,以脱饲养层法悬浮培养扩增的细胞,直到拟胚体形成及贴壁分化.主要观察指标:通过免疫荧光检测胚胎干细胞特异性表面标志物的表达、碱性磷酸酶染色及染色体核型分析,对所培养细胞进行鉴定.检测裸鼠体内畸胎瘤的形成及组织分化.免疫组化染色观察体外肌肉特异性肌动蛋白、巢蛋白、广谱细胞角蛋白的表达.结果:①传至第2、7代的人胚胎原始生殖细胞SSEA-4,SSEA-3,TRA-1-60,TRA-1-81等表面标志物均呈阳性表达,碱性磷酸酶染色呈阳性,染色体分析为正常二倍体核型46XX.②接种8周末,2只小鼠均形成皮下畸胎瘤,其内存在囊括3个胚层的组织结构,包括皮脂腺、脂肪、腺体及腺上皮、鳞状上皮等.③培养第4天形成拟胚体,肌肉特异性肌动蛋白、巢蛋白、广谱细胞角蛋白均呈阳性表达.结论:人子宫内膜成纤维细胞可以作为人原始生殖细胞的饲养层细胞,传代后的原始生殖细胞仍保持胚胎干细胞的未分化状态和发育全能性. 揹景:目前在胚胎多潛能榦細胞建繫和培養過程中,存在著建繫率低、具有正常覈型的榦細胞繫比率低等問題.目的:觀察接種于人子宮內膜成纖維細胞飼養層上原代培養的人原始生殖細胞在體內外的生物學特性.設計、時間及地點:細胞觀察,于2004-01/2005-04在瀋暘市婦嬰醫院和中國醫科大學完成.材料:人胚胎來源于流產孕婦,用于分離培養原始生殖細胞.人子宮內膜來源于因子宮肌瘤行子宮切除術的患者,用于製備成纖維細胞飼養層.清潔級10週齡雄性裸鼠2隻,用于體內分化實驗.方法:從人胚胎生殖嵴、腸繫膜中消化分離的原始生殖細胞,將其接種在人子宮內膜成纖維細胞飼養層上傳代培養.體內實驗取連續傳5代的2箇細胞株,分彆製備濃度為1×109 L-1的細胞懸液,于每隻小鼠兩側腹股溝處皮下各接種0.5 mL,培養8週.體外分化採用無黏附特性的培養瓶和除去白血病抑製因子的原始牛殖細胞培養液,以脫飼養層法懸浮培養擴增的細胞,直到擬胚體形成及貼壁分化.主要觀察指標:通過免疫熒光檢測胚胎榦細胞特異性錶麵標誌物的錶達、堿性燐痠酶染色及染色體覈型分析,對所培養細胞進行鑒定.檢測裸鼠體內畸胎瘤的形成及組織分化.免疫組化染色觀察體外肌肉特異性肌動蛋白、巢蛋白、廣譜細胞角蛋白的錶達.結果:①傳至第2、7代的人胚胎原始生殖細胞SSEA-4,SSEA-3,TRA-1-60,TRA-1-81等錶麵標誌物均呈暘性錶達,堿性燐痠酶染色呈暘性,染色體分析為正常二倍體覈型46XX.②接種8週末,2隻小鼠均形成皮下畸胎瘤,其內存在囊括3箇胚層的組織結構,包括皮脂腺、脂肪、腺體及腺上皮、鱗狀上皮等.③培養第4天形成擬胚體,肌肉特異性肌動蛋白、巢蛋白、廣譜細胞角蛋白均呈暘性錶達.結論:人子宮內膜成纖維細胞可以作為人原始生殖細胞的飼養層細胞,傳代後的原始生殖細胞仍保持胚胎榦細胞的未分化狀態和髮育全能性.
배경:목전재배태다잠능간세포건계화배양과정중,존재착건계솔저、구유정상핵형적간세포계비솔저등문제.목적:관찰접충우인자궁내막성섬유세포사양층상원대배양적인원시생식세포재체내외적생물학특성.설계、시간급지점:세포관찰,우2004-01/2005-04재침양시부영의원화중국의과대학완성.재료:인배태래원우유산잉부,용우분리배양원시생식세포.인자궁내막래원우인자궁기류행자궁절제술적환자,용우제비성섬유세포사양층.청길급10주령웅성라서2지,용우체내분화실험.방법:종인배태생식척、장계막중소화분리적원시생식세포,장기접충재인자궁내막성섬유세포사양층상전대배양.체내실험취련속전5대적2개세포주,분별제비농도위1×109 L-1적세포현액,우매지소서량측복고구처피하각접충0.5 mL,배양8주.체외분화채용무점부특성적배양병화제거백혈병억제인자적원시우식세포배양액,이탈사양층법현부배양확증적세포,직도의배체형성급첩벽분화.주요관찰지표:통과면역형광검측배태간세포특이성표면표지물적표체、감성린산매염색급염색체핵형분석,대소배양세포진행감정.검측라서체내기태류적형성급조직분화.면역조화염색관찰체외기육특이성기동단백、소단백、엄보세포각단백적표체.결과:①전지제2、7대적인배태원시생식세포SSEA-4,SSEA-3,TRA-1-60,TRA-1-81등표면표지물균정양성표체,감성린산매염색정양성,염색체분석위정상이배체핵형46XX.②접충8주말,2지소서균형성피하기태류,기내존재낭괄3개배층적조직결구,포괄피지선、지방、선체급선상피、린상상피등.③배양제4천형성의배체,기육특이성기동단백、소단백、엄보세포각단백균정양성표체.결론:인자궁내막성섬유세포가이작위인원시생식세포적사양층세포,전대후적원시생식세포잉보지배태간세포적미분화상태화발육전능성.