白血病过继免疫治疗时外周血T淋巴细胞诱导培养后的克隆性变化
백혈병과계면역치료시외주혈T림파세포유도배양후적극륭성변화
Changes of T-cell Clonality after Inductlon-cultivation of Peripheral T Lymphocytes in Adoptive Immunotherapy for Leukemias
  • 万方数据
    中国实验血液学杂志 중국실험혈액학잡지
    JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
    2009年 3期 621-626 ,共6页

    刘岩%顾江英%欧媛%李绵洋%王赫%靳娴%陶秀艳%刘兆利%马杏凡%王秀丽%马思琨%康蕊%蔡鹏%童春容%朱平

    류암%고강영%구원%리면양%왕혁%근한%도수염%류조리%마행범%왕수려%마사곤%강예%채붕%동춘용%주평

    白血病%过继免疫治疗%T细胞克隆%T细胞受体亚家族(TCRBV)%基因扫描 白血病%過繼免疫治療%T細胞剋隆%T細胞受體亞傢族(TCRBV)%基因掃描
    백혈병%과계면역치료%T세포극륭%T세포수체아가족(TCRBV)%기인소묘
    本研究分析白血病细胞免疫时自体树突细胞(DC)和多种细胞因子诱导外周血淋巴细胞后T细胞克隆性的变化.采集21例化疗缓解后行细胞免疫治疗的白血病患者的骨髓和外周血,加入细胞因子培养,获得树突细胞(DC)和激活T细胞.用RT-PCR扩增代表T细胞克隆性的T细胞受体β链可变区(T-cell receptor β variable region,TCRBV),用TCRBV基因扫描的方法观察培养前后T细胞克隆的特征性变化;对T细胞克隆的TCRBV进行序列分析.流式细胞术(FCM)检测CD3+、CD4+、CD8+、CD56+和CD4+ CD25str+FOXP3+,确定其细胞毒T细胞、辅助T细胞、调节T细胞和NK-T细胞的比例变化.结果表明:临床缓解后的白血病患者的T细胞呈寡克隆分布,分属在24个TCRBV家族中一些TCRBV基因家族的淋巴细胞克隆消失,仅少数保持多克隆分布,其中TCRBV 24基因家族均为克隆性的分布(100%).分析患者的TCRBV24基因序列特征时发现.3例在CDR3区共用motif VAG,2例共用GGG,表明这些TCRBV 24有可能识别同一抗原,其中1例(例5)患者除TCRBV24在CDR3区有motif GGG外,TCRBV8也有GGG,也可能会识别同一抗原.外周血淋巴细胞经过13天的体外抗原和细胞因子培养后,培养前出现的一些寡克隆以及克隆完全缺失的状态随即出现了明显变化,培养后都出现完整多克隆分布.将培养前后T细胞进行流式细胞术分析显示,培养后淋巴细胞数目为培养前的3.38±1.20倍,CD3+ 数培养前为(71.1±11.8)%细胞,培养第13天后为(95.4±3.2)%,明显增加;CD4+数培养前为(26.7±11.4)%,培养第13天后为(27.0±13.1)%,无明显变化(p>0.01);CD8+数培养前为(35.7±12.9)%,培养第13天后为(55.5±13.8)%,明显增加(p<0.01);CD3+ CD56+数培养前为(3.1±1.6)%,培养第13天后为(9.8±6.1)%,增加2倍多(p<0.01);CD4+CD25str+ FOX P3+数培养前为(0.12±0.1)%,培养第13天后为(0.22±0.18)%(p<0.01).结论:T淋巴细胞诱导培养方法的主要作用是促进CTL和NK细胞增殖,缓解后白血病患者体内淋巴细胞群往往呈寡克隆增殖,一些克隆会共用同样的TCRBV CDR3模体,识别同样的抗原,细胞因子联合诱导与DC共培养后淋巴细胞恢复多克隆免疫状态,产生以CTL和NK-T为主的效应细胞.
    본연구분석백혈병세포면역시자체수돌세포(DC)화다충세포인자유도외주혈림파세포후T세포극륭성적변화.채집21례화료완해후행세포면역치료적백혈병환자적골수화외주혈,가입세포인자배양,획득수돌세포(DC)화격활T세포.용RT-PCR확증대표T세포극륭성적T세포수체β련가변구(T-cell receptor β variable region,TCRBV),용TCRBV기인소묘적방법관찰배양전후T세포극륭적특정성변화;대T세포극륭적TCRBV진행서렬분석.류식세포술(FCM)검측CD3+、CD4+、CD8+、CD56+화CD4+ CD25str+FOXP3+,학정기세포독T세포、보조T세포、조절T세포화NK-T세포적비례변화.결과표명:림상완해후적백혈병환자적T세포정과극륭분포,분속재24개TCRBV가족중일사TCRBV기인가족적림파세포극륭소실,부소수보지다극륭분포,기중TCRBV 24기인가족균위극륭성적분포(100%).분석환자적TCRBV24기인서렬특정시발현.3례재CDR3구공용motif VAG,2례공용GGG,표명저사TCRBV 24유가능식별동일항원,기중1례(례5)환자제TCRBV24재CDR3구유motif GGG외,TCRBV8야유GGG,야가능회식별동일항원.외주혈림파세포경과13천적체외항원화세포인자배양후,배양전출현적일사과극륭이급극륭완전결실적상태수즉출현료명현변화,배양후도출현완정다극륭분포.장배양전후T세포진행류식세포술분석현시,배양후림파세포수목위배양전적3.38±1.20배,CD3+ 수배양전위(71.1±11.8)%세포,배양제13천후위(95.4±3.2)%,명현증가;CD4+수배양전위(26.7±11.4)%,배양제13천후위(27.0±13.1)%,무명현변화(p>0.01);CD8+수배양전위(35.7±12.9)%,배양제13천후위(55.5±13.8)%,명현증가(p<0.01);CD3+ CD56+수배양전위(3.1±1.6)%,배양제13천후위(9.8±6.1)%,증가2배다(p<0.01);CD4+CD25str+ FOX P3+수배양전위(0.12±0.1)%,배양제13천후위(0.22±0.18)%(p<0.01).결론:T림파세포유도배양방법적주요작용시촉진CTL화NK세포증식,완해후백혈병환자체내림파세포군왕왕정과극륭증식,일사극륭회공용동양적TCRBV CDR3모체,식별동양적항원,세포인자연합유도여DC공배양후림파세포회복다극륭면역상태,산생이CTL화NK-T위주적효응세포.
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