CAJ | 학술논문

目的:探讨黏蛋白1(mucins 1,MUC1)基因磁转染体外人树突状细胞(dendritic cell,DC)的可行性,观察其诱导的特异性抗MUC1膀胱癌CTL的免疫效应.方法:以葡聚糖磁性纳米颗粒(DMN)作为载体,在多聚赖氨酸(PLL)的辅助下,通过静电作用结合MUC1基因的真核表达载体pEGFP-C1-MUC1,在钕-铁-硼稀土强磁块的磁场作用下转染DC,荧光显微镜下观察及流式细胞术检测转染效率,并用RT-PCR法检测转基因DC中MUC1基因的表达;再将转染MUC1基因的DC与自体T细胞共培养,并分别用乳酸脱氢酶释放法检测所致敏的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte,CTL)对MUCI特异性抗膀胱癌(膀胱肿瘤BIU87细胞系)的杀伤活性,用透射电镜观察CTL诱导靶细胞凋亡情况;ELISA法测定MUC1基因修饰后的DC刺激自体T细胞分泌IFN-γ的能力.结果:pEGFP-C1-MUC1转染效率为10%左右,荧光显微镜下可观察到明显绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR法可检测到MUC1条带,转染MUC1基因的DC与自体T细胞混合培养后能诱导出MUC1特异性的CTL,对BIU87细胞的杀伤实验表明T-DC-MUC1的杀伤活性显著高于对照组T-DC-pEGFP-C1和T-DC诱导的CTL(P均<0.05);在透射电镜下也可观察到部分BIU87膀胱肿瘤细胞出现了细胞核核仁消失,染色质浓集于核膜周围等早期凋亡表现;基因修饰后的DC能刺激自体T细胞分泌高水平的IFN-γ,明显高于未转染的DC(P<0.05).结论:葡聚糖磁性纳米颗粒在同定磁场的作用下成功将MUC1基因转入DC,并可有效诱导出特异性抗MUC1膀胱癌的细胞毒性T细胞.
목적:탐토점단백1(mucins 1,MUC1)기인자전염체외인수돌상세포(dendritic cell,DC)적가행성,관찰기유도적특이성항MUC1방광암CTL적면역효응.방법:이포취당자성납미과립(DMN)작위재체,재다취뢰안산(PLL)적보조하,통과정전작용결합MUC1기인적진핵표체재체pEGFP-C1-MUC1,재녀-철-붕희토강자괴적자장작용하전염DC,형광현미경하관찰급류식세포술검측전염효솔,병용RT-PCR법검측전기인DC중MUC1기인적표체;재장전염MUC1기인적DC여자체T세포공배양,병분별용유산탈경매석방법검측소치민적세포독성T림파세포(cytotoxic lymphocyte,CTL)대MUCI특이성항방광암(방광종류BIU87세포계)적살상활성,용투사전경관찰CTL유도파세포조망정황;ELISA법측정MUC1기인수식후적DC자격자체T세포분비IFN-γ적능력.결과:pEGFP-C1-MUC1전염효솔위10%좌우,형광현미경하가관찰도명현록색형광단백적표체,RT-PCR법가검측도MUC1조대,전염MUC1기인적DC여자체T세포혼합배양후능유도출MUC1특이성적CTL,대BIU87세포적살상실험표명T-DC-MUC1적살상활성현저고우대조조T-DC-pEGFP-C1화T-DC유도적CTL(P균<0.05);재투사전경하야가관찰도부분BIU87방광종류세포출현료세포핵핵인소실,염색질농집우핵막주위등조기조망표현;기인수식후적DC능자격자체T세포분비고수평적IFN-γ,명현고우미전염적DC(P<0.05).결론:포취당자성납미과립재동정자장적작용하성공장MUC1기인전입DC,병가유효유도출특이성항MUC1방광암적세포독성T세포.