北方园艺
北方園藝
북방완예
NORTHERN HORTICULTURE
2012年
12期
107-112
,共6页
王文玲%王贤磊%熊丽曼%高兴旺%李冠
王文玲%王賢磊%熊麗曼%高興旺%李冠
왕문령%왕현뢰%웅려만%고흥왕%리관
At2基因%双T-DNA%植物表达载体%无选择标记
At2基因%雙T-DNA%植物錶達載體%無選擇標記
At2기인%쌍T-DNA%식물표체재체%무선택표기
以甜瓜品种‘MR-1'为试材,采用PCR技术,扩增出了At2基因并在两端添加BamH1和SacⅠ酶切位点.结果表明:在NCBI上进行BLAST显示其氨基酸序列与GeneBank中已公布的At2基因的同源性为99％；经DNAMAN软件分析,核苷酸序列同源性为99.43％.将其连接在中间表达载体G-pPTN133上,得到替换了GUS基因的中间载体A-pPTN133.A-pPTN133再经Sca Ⅰ酶切后,插入到经ScaⅠ酶切的pPTN133-中,构建成双T-DNA植物表达载体At2-pPTN133.经酶切和PCR鉴定证明了所构建载体的正确性.
以甜瓜品種‘MR-1'為試材,採用PCR技術,擴增齣瞭At2基因併在兩耑添加BamH1和SacⅠ酶切位點.結果錶明:在NCBI上進行BLAST顯示其氨基痠序列與GeneBank中已公佈的At2基因的同源性為99％；經DNAMAN軟件分析,覈苷痠序列同源性為99.43％.將其連接在中間錶達載體G-pPTN133上,得到替換瞭GUS基因的中間載體A-pPTN133.A-pPTN133再經Sca Ⅰ酶切後,插入到經ScaⅠ酶切的pPTN133-中,構建成雙T-DNA植物錶達載體At2-pPTN133.經酶切和PCR鑒定證明瞭所構建載體的正確性.
이첨과품충‘MR-1'위시재,채용PCR기술,확증출료At2기인병재량단첨가BamH1화SacⅠ매절위점.결과표명:재NCBI상진행BLAST현시기안기산서렬여GeneBank중이공포적At2기인적동원성위99％；경DNAMAN연건분석,핵감산서렬동원성위99.43％.장기련접재중간표체재체G-pPTN133상,득도체환료GUS기인적중간재체A-pPTN133.A-pPTN133재경Sca Ⅰ매절후,삽입도경ScaⅠ매절적pPTN133-중,구건성쌍T-DNA식물표체재체At2-pPTN133.경매절화PCR감정증명료소구건재체적정학성.
