实用预防医学
實用預防醫學
실용예방의학
PRACTICAL PREVENTIVE MEDICINE
2012年
5期
647-650
,共4页
熊志红%朱琰%李仁德%庄玉辉%程小星
熊誌紅%硃琰%李仁德%莊玉輝%程小星
웅지홍%주염%리인덕%장옥휘%정소성
结核分枝杆菌%PPE60%GST-融合蛋白%表达与鉴定
結覈分枝桿菌%PPE60%GST-融閤蛋白%錶達與鑒定
결핵분지간균%PPE60%GST-융합단백%표체여감정
目的 构建结核分枝杆菌PPE60的GST融合蛋白表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白.方法 以结核分枝杆菌标准株H37Rv基因组DNA为模板,经PCR技术扩增目的基因,将目的基因克隆到pGEX - 4T -1载体中,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆.进行质粒的酶切鉴定和序列分析；对重组的大肠杆菌进行诱导表达,SDS-PAGE分析菌体蛋白,凝胶密度扫描分析目的蛋白的表达情况,Western- blot鉴定融合蛋白.结果 正确构建了pGEX-PPE60融合表达载体,载体能在大肠杆菌中表达分子量约为70kDa的重组蛋白,占菌体总蛋白的50％.该融合蛋白能与GST抗体产生阳性反应.结论 成功构建了GST - PPE60融合蛋白的表达载体,并能在大肠杆菌中高效表达,为PPE60蛋白的功能研究奠定了基础.
目的 構建結覈分枝桿菌PPE60的GST融閤蛋白錶達載體,併在大腸桿菌中誘導錶達融閤蛋白.方法 以結覈分枝桿菌標準株H37Rv基因組DNA為模闆,經PCR技術擴增目的基因,將目的基因剋隆到pGEX - 4T -1載體中,轉化大腸桿菌DH5α,篩選暘性剋隆.進行質粒的酶切鑒定和序列分析；對重組的大腸桿菌進行誘導錶達,SDS-PAGE分析菌體蛋白,凝膠密度掃描分析目的蛋白的錶達情況,Western- blot鑒定融閤蛋白.結果 正確構建瞭pGEX-PPE60融閤錶達載體,載體能在大腸桿菌中錶達分子量約為70kDa的重組蛋白,佔菌體總蛋白的50％.該融閤蛋白能與GST抗體產生暘性反應.結論 成功構建瞭GST - PPE60融閤蛋白的錶達載體,併能在大腸桿菌中高效錶達,為PPE60蛋白的功能研究奠定瞭基礎.
목적 구건결핵분지간균PPE60적GST융합단백표체재체,병재대장간균중유도표체융합단백.방법 이결핵분지간균표준주H37Rv기인조DNA위모판,경PCR기술확증목적기인,장목적기인극륭도pGEX - 4T -1재체중,전화대장간균DH5α,사선양성극륭.진행질립적매절감정화서렬분석；대중조적대장간균진행유도표체,SDS-PAGE분석균체단백,응효밀도소묘분석목적단백적표체정황,Western- blot감정융합단백.결과 정학구건료pGEX-PPE60융합표체재체,재체능재대장간균중표체분자량약위70kDa적중조단백,점균체총단백적50％.해융합단백능여GST항체산생양성반응.결론 성공구건료GST - PPE60융합단백적표체재체,병능재대장간균중고효표체,위PPE60단백적공능연구전정료기출.
