中国医科大学学报
中國醫科大學學報
중국의과대학학보
JOURNAL OF CHINA MEDICAL UNIVERSITY
2012年
7期
603-606
,共4页
张海燕%都镇先%孟欣%邓娓娓%王华芹
張海燕%都鎮先%孟訢%鄧娓娓%王華芹
장해연%도진선%맹흔%산미미%왕화근
胱天蛋白酶%BAG3%裂解%凋亡
胱天蛋白酶%BAG3%裂解%凋亡
광천단백매%BAG3%렬해%조망
目的 解析胱天蛋白酶(caspase)3介导BCL2结合抗凋亡基因3(BAG3)酶切的具体作用靶点,明确caspase 3裂解对BAG3抗凋亡作用的影响.方法 采用生物信息学方法筛选BAG3蛋白序列中潜在caspase酶切位点；采用定点突变法构建潜在caspase酶切位点突变体；体外翻译野生型和突变型BAG3蛋白；利用重组caspase对野生型或突变型重组BAG3蛋白进行体外剪切实验；构建BAG3裂解片段的真核表达载体,突变型或片段BAG3表达载体转染SW 1990细胞；利用Westemblot检测各组细胞中BAG3蛋白的裂解情况；利用流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 在BAG3蛋白序列中存在K344EVD347和L515EAD518 2个潜在caspase酶切位点；caspase3可有效剪切D518A突变型BAG3,而不能剪切D347A突变型BAG3; D518A突变型和野生型BAG3同等程度抑制MG132诱导的细胞凋亡,D347A突变型BAG3对细胞凋亡的保护作用高于D518A突变型或野生型BAG3,而N末端和C末端剪切片段BAG3对MG132诱导的细胞凋亡无作用.结论 caspase3主要在D347位点裂解BAG3蛋白；BAG3在D347位点的剪切使其丧失了原有的抗凋亡作用.
目的 解析胱天蛋白酶(caspase)3介導BCL2結閤抗凋亡基因3(BAG3)酶切的具體作用靶點,明確caspase 3裂解對BAG3抗凋亡作用的影響.方法 採用生物信息學方法篩選BAG3蛋白序列中潛在caspase酶切位點；採用定點突變法構建潛在caspase酶切位點突變體；體外翻譯野生型和突變型BAG3蛋白；利用重組caspase對野生型或突變型重組BAG3蛋白進行體外剪切實驗；構建BAG3裂解片段的真覈錶達載體,突變型或片段BAG3錶達載體轉染SW 1990細胞；利用Westemblot檢測各組細胞中BAG3蛋白的裂解情況；利用流式細胞儀檢測細胞凋亡率.結果 在BAG3蛋白序列中存在K344EVD347和L515EAD518 2箇潛在caspase酶切位點；caspase3可有效剪切D518A突變型BAG3,而不能剪切D347A突變型BAG3; D518A突變型和野生型BAG3同等程度抑製MG132誘導的細胞凋亡,D347A突變型BAG3對細胞凋亡的保護作用高于D518A突變型或野生型BAG3,而N末耑和C末耑剪切片段BAG3對MG132誘導的細胞凋亡無作用.結論 caspase3主要在D347位點裂解BAG3蛋白；BAG3在D347位點的剪切使其喪失瞭原有的抗凋亡作用.
목적 해석광천단백매(caspase)3개도BCL2결합항조망기인3(BAG3)매절적구체작용파점,명학caspase 3렬해대BAG3항조망작용적영향.방법 채용생물신식학방법사선BAG3단백서렬중잠재caspase매절위점；채용정점돌변법구건잠재caspase매절위점돌변체；체외번역야생형화돌변형BAG3단백；이용중조caspase대야생형혹돌변형중조BAG3단백진행체외전절실험；구건BAG3렬해편단적진핵표체재체,돌변형혹편단BAG3표체재체전염SW 1990세포；이용Westemblot검측각조세포중BAG3단백적렬해정황；이용류식세포의검측세포조망솔.결과 재BAG3단백서렬중존재K344EVD347화L515EAD518 2개잠재caspase매절위점；caspase3가유효전절D518A돌변형BAG3,이불능전절D347A돌변형BAG3; D518A돌변형화야생형BAG3동등정도억제MG132유도적세포조망,D347A돌변형BAG3대세포조망적보호작용고우D518A돌변형혹야생형BAG3,이N말단화C말단전절편단BAG3대MG132유도적세포조망무작용.결론 caspase3주요재D347위점렬해BAG3단백；BAG3재D347위점적전절사기상실료원유적항조망작용.
