细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2004年
5期
578-581
,共4页
郭爱林%曹云新%王文%丁波%黄郁强%文剑明
郭愛林%曹雲新%王文%丁波%黃鬱彊%文劍明
곽애림%조운신%왕문%정파%황욱강%문검명
肝再生磷酸酯酶2%融合蛋白%亲和层析%鸡卵黄抗体
肝再生燐痠酯酶2%融閤蛋白%親和層析%鷄卵黃抗體
간재생린산지매2%융합단백%친화층석%계란황항체
目的:原核表达人肝再生磷酸酯酶2(PRL-2)与谷胱甘肽S转移酶(GST)和6个串联组氨酸(6×His)的融合蛋白,并制备GST-PRL-2特异性鸡卵黄抗体.方法:将人PRL-2 cDNA的全长蛋白编码序列,克隆入两种原核表达载体pGEX-4T-2和pET21a中,在大肠杆菌BL21中诱导表达融合蛋白.用Glutathione Sepharose 4B和Ni-NTA agarose亲和柱分别纯化目的蛋白.以纯化的GST-PRL-2融合蛋白免疫产蛋母鸡制备多克隆抗体,应用6×His-PRL-2对抗体进行亲和层析纯化,纯化产物用Western blot进行分析.结果:得到高表达量的融合蛋白,经亲和层析柱纯化后获得较高纯度的GST-PRL-2和6×His PRL-2融合蛋白.以GST-PRL-2融合蛋白免疫鸡得到抗PRL-2的多克隆抗体,Western blot证实,经6×His PRL-2亲和层析纯化的抗体,能够识别6×His-PRL-2和GST-PRL-2融合蛋白,但不同GST蛋白起反应,表明具有较高的特异性.结论:利用原核表达的人PRL-2融合蛋白制备的抗PRL-2多克隆抗体具有较好的特异性,为研究PRL-2蛋白在细胞信号转导过程中的作用提供了重要的技术和材料保障.
目的:原覈錶達人肝再生燐痠酯酶2(PRL-2)與穀胱甘肽S轉移酶(GST)和6箇串聯組氨痠(6×His)的融閤蛋白,併製備GST-PRL-2特異性鷄卵黃抗體.方法:將人PRL-2 cDNA的全長蛋白編碼序列,剋隆入兩種原覈錶達載體pGEX-4T-2和pET21a中,在大腸桿菌BL21中誘導錶達融閤蛋白.用Glutathione Sepharose 4B和Ni-NTA agarose親和柱分彆純化目的蛋白.以純化的GST-PRL-2融閤蛋白免疫產蛋母鷄製備多剋隆抗體,應用6×His-PRL-2對抗體進行親和層析純化,純化產物用Western blot進行分析.結果:得到高錶達量的融閤蛋白,經親和層析柱純化後穫得較高純度的GST-PRL-2和6×His PRL-2融閤蛋白.以GST-PRL-2融閤蛋白免疫鷄得到抗PRL-2的多剋隆抗體,Western blot證實,經6×His PRL-2親和層析純化的抗體,能夠識彆6×His-PRL-2和GST-PRL-2融閤蛋白,但不同GST蛋白起反應,錶明具有較高的特異性.結論:利用原覈錶達的人PRL-2融閤蛋白製備的抗PRL-2多剋隆抗體具有較好的特異性,為研究PRL-2蛋白在細胞信號轉導過程中的作用提供瞭重要的技術和材料保障.
목적:원핵표체인간재생린산지매2(PRL-2)여곡광감태S전이매(GST)화6개천련조안산(6×His)적융합단백,병제비GST-PRL-2특이성계란황항체.방법:장인PRL-2 cDNA적전장단백편마서렬,극륭입량충원핵표체재체pGEX-4T-2화pET21a중,재대장간균BL21중유도표체융합단백.용Glutathione Sepharose 4B화Ni-NTA agarose친화주분별순화목적단백.이순화적GST-PRL-2융합단백면역산단모계제비다극륭항체,응용6×His-PRL-2대항체진행친화층석순화,순화산물용Western blot진행분석.결과:득도고표체량적융합단백,경친화층석주순화후획득교고순도적GST-PRL-2화6×His PRL-2융합단백.이GST-PRL-2융합단백면역계득도항PRL-2적다극륭항체,Western blot증실,경6×His PRL-2친화층석순화적항체,능구식별6×His-PRL-2화GST-PRL-2융합단백,단불동GST단백기반응,표명구유교고적특이성.결론:이용원핵표체적인PRL-2융합단백제비적항PRL-2다극륭항체구유교호적특이성,위연구PRL-2단백재세포신호전도과정중적작용제공료중요적기술화재료보장.
