中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2005年
1期
40-42
,共3页
猪%β干扰素基因%克隆%表达%生物活性
豬%β榦擾素基因%剋隆%錶達%生物活性
저%β간우소기인%극륭%표체%생물활성
利用PCR技术从中国梅山猪白细胞总DNA中扩增出猪β干扰素基因(MS-IFNβ).将PCR产物克隆至pMD18-T载体,利用双脱氧末端终止法测定了全基因的核苷酸序列.序列分析表明,β干扰素基因全长561 bp,编码186个氨基酸,与GenBank中S41178的序列同源性达99%,在128、177位核苷酸处发生了点变异,由G变为A,T变为C,但仅导致43位氨基酸由G变为E.在此基础上,合成了1对引物,通过PCR方法将编码成熟蛋白基因亚克隆到pGEX-KG表达载体,转化宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导后,得到高效表达,所表达蛋白质的大小约为47000,占总蛋白的23%.表达产物主要为不溶性的包涵体,包涵体经提纯后,能够抑制口蹄疫病毒(FMDV)增殖.
利用PCR技術從中國梅山豬白細胞總DNA中擴增齣豬β榦擾素基因(MS-IFNβ).將PCR產物剋隆至pMD18-T載體,利用雙脫氧末耑終止法測定瞭全基因的覈苷痠序列.序列分析錶明,β榦擾素基因全長561 bp,編碼186箇氨基痠,與GenBank中S41178的序列同源性達99%,在128、177位覈苷痠處髮生瞭點變異,由G變為A,T變為C,但僅導緻43位氨基痠由G變為E.在此基礎上,閤成瞭1對引物,通過PCR方法將編碼成熟蛋白基因亞剋隆到pGEX-KG錶達載體,轉化宿主菌BL21(DE3),經IPTG誘導後,得到高效錶達,所錶達蛋白質的大小約為47000,佔總蛋白的23%.錶達產物主要為不溶性的包涵體,包涵體經提純後,能夠抑製口蹄疫病毒(FMDV)增殖.
이용PCR기술종중국매산저백세포총DNA중확증출저β간우소기인(MS-IFNβ).장PCR산물극륭지pMD18-T재체,이용쌍탈양말단종지법측정료전기인적핵감산서렬.서렬분석표명,β간우소기인전장561 bp,편마186개안기산,여GenBank중S41178적서렬동원성체99%,재128、177위핵감산처발생료점변이,유G변위A,T변위C,단부도치43위안기산유G변위E.재차기출상,합성료1대인물,통과PCR방법장편마성숙단백기인아극륭도pGEX-KG표체재체,전화숙주균BL21(DE3),경IPTG유도후,득도고효표체,소표체단백질적대소약위47000,점총단백적23%.표체산물주요위불용성적포함체,포함체경제순후,능구억제구제역병독(FMDV)증식.
