免疫学杂志
免疫學雜誌
면역학잡지
IMMUNOLOGICAL JOURNAL
2005年
6期
482-484,488
,共4页
晏辉钧%江丽芳%方丹云%周经姣%郭辉玉
晏輝鈞%江麗芳%方丹雲%週經姣%郭輝玉
안휘균%강려방%방단운%주경교%곽휘옥
登革2型病毒%NS3基因%巴氏毕赤酵母%基因表达%抗体
登革2型病毒%NS3基因%巴氏畢赤酵母%基因錶達%抗體
등혁2형병독%NS3기인%파씨필적효모%기인표체%항체
目的克隆登革2型病毒(DEN2)NS3基因并用酵母真核表达,获得全长的重组NS3蛋白质,为其结构与功能的研究提供条件.方法从感染DEN2(NGC株)后病变的C6/36细胞上清液中提取RNA,通过RT-PCR扩增NS3基因片段,与载体pPICZαB连接筛选得到重组质粒,电穿孔法将重组体整合入酵母菌P.pastoris,经抗生素Zeocin筛选产生的转化子进行表型鉴定,取Mut+菌诱导表达,SDS-PAGE检测表达产物.结果 RT-PCR得到1.85kb的NS3基因片段,酶切鉴定与测序显示重组质粒含DEN2全长NS3基因;Mut+酵母转化菌可分泌表达Mr约78 000的蛋白质,与DEN2多抗和登革2型病毒患者恢复期血清的免疫印迹证实它为型特异的重组NS3蛋白质.结论成功将克隆的全长DEN2 NS3基因在酵母菌中表达,获得的重组NS3蛋白质具有免疫反应性.
目的剋隆登革2型病毒(DEN2)NS3基因併用酵母真覈錶達,穫得全長的重組NS3蛋白質,為其結構與功能的研究提供條件.方法從感染DEN2(NGC株)後病變的C6/36細胞上清液中提取RNA,通過RT-PCR擴增NS3基因片段,與載體pPICZαB連接篩選得到重組質粒,電穿孔法將重組體整閤入酵母菌P.pastoris,經抗生素Zeocin篩選產生的轉化子進行錶型鑒定,取Mut+菌誘導錶達,SDS-PAGE檢測錶達產物.結果 RT-PCR得到1.85kb的NS3基因片段,酶切鑒定與測序顯示重組質粒含DEN2全長NS3基因;Mut+酵母轉化菌可分泌錶達Mr約78 000的蛋白質,與DEN2多抗和登革2型病毒患者恢複期血清的免疫印跡證實它為型特異的重組NS3蛋白質.結論成功將剋隆的全長DEN2 NS3基因在酵母菌中錶達,穫得的重組NS3蛋白質具有免疫反應性.
목적극륭등혁2형병독(DEN2)NS3기인병용효모진핵표체,획득전장적중조NS3단백질,위기결구여공능적연구제공조건.방법종감염DEN2(NGC주)후병변적C6/36세포상청액중제취RNA,통과RT-PCR확증NS3기인편단,여재체pPICZαB련접사선득도중조질립,전천공법장중조체정합입효모균P.pastoris,경항생소Zeocin사선산생적전화자진행표형감정,취Mut+균유도표체,SDS-PAGE검측표체산물.결과 RT-PCR득도1.85kb적NS3기인편단,매절감정여측서현시중조질립함DEN2전장NS3기인;Mut+효모전화균가분비표체Mr약78 000적단백질,여DEN2다항화등혁2형병독환자회복기혈청적면역인적증실타위형특이적중조NS3단백질.결론성공장극륭적전장DEN2 NS3기인재효모균중표체,획득적중조NS3단백질구유면역반응성.
