山东大学学报（医学版）
山東大學學報（醫學版）
산동대학학보（의학판）
JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES)
2006年
10期
1048-1052
,共5页
衣翠华%侯明%李丽珍%张昕%魏军民%黎莉%郝静
衣翠華%侯明%李麗珍%張昕%魏軍民%黎莉%郝靜
의취화%후명%리려진%장흔%위군민%려리%학정
RNA干扰%HER2/neu基因%卵巢癌%基因疗法
RNA榦擾%HER2/neu基因%卵巢癌%基因療法
RNA간우%HER2/neu기인%란소암%기인요법
目的:观察siRNA表达质粒稳定转染靶向沉默HER2/neu基因对SK-OV-3卵巢癌细胞株的影响.方法:针对HER2/neu基因序列构建短发夹状siRNA真核表达载体(pGenesil-1-HER2/neu),转染卵巢癌细胞株SK-OV-3,G418筛选出稳定转染株后,采用RT-PCR和Western Blot法观察HER2/neu基因的沉默效果;CCK-8比色分析检测细胞体外增殖活力;流式细胞仪检测细胞周期.结果:测序证实成功构建HER2/neu的2个短发夹状siRNA真核表达质粒;稳定转染SK-OV-3细胞后,转染了特异性HER-2/neu siRNA的细胞HER-2/neu mRNA及p185蛋白水平均明显低于亲本细胞及转染无义对照序列的细胞;CCK-8比色分析显示HER-2/neu基因沉默的细胞存活分数明显低于HER-2/neu基因高表达的细胞(P=0.000);流式细胞仪细胞周期分析也显示,HER-2/neu基因沉默的细胞处于凋亡状态及非增殖期的比例明显增加(P均＜0.01),而处于合成期的比例却显著减少(P≤0.001).结论:靶向HER2/neu基因的短发夹状siRNA可从转录及翻译水平有效地沉默HER-2/neu基因;HER-2/neu基因沉默的SK-OV-3卵巢癌细胞增殖明显受抑制.
目的:觀察siRNA錶達質粒穩定轉染靶嚮沉默HER2/neu基因對SK-OV-3卵巢癌細胞株的影響.方法:針對HER2/neu基因序列構建短髮夾狀siRNA真覈錶達載體(pGenesil-1-HER2/neu),轉染卵巢癌細胞株SK-OV-3,G418篩選齣穩定轉染株後,採用RT-PCR和Western Blot法觀察HER2/neu基因的沉默效果;CCK-8比色分析檢測細胞體外增殖活力;流式細胞儀檢測細胞週期.結果:測序證實成功構建HER2/neu的2箇短髮夾狀siRNA真覈錶達質粒;穩定轉染SK-OV-3細胞後,轉染瞭特異性HER-2/neu siRNA的細胞HER-2/neu mRNA及p185蛋白水平均明顯低于親本細胞及轉染無義對照序列的細胞;CCK-8比色分析顯示HER-2/neu基因沉默的細胞存活分數明顯低于HER-2/neu基因高錶達的細胞(P=0.000);流式細胞儀細胞週期分析也顯示,HER-2/neu基因沉默的細胞處于凋亡狀態及非增殖期的比例明顯增加(P均＜0.01),而處于閤成期的比例卻顯著減少(P≤0.001).結論:靶嚮HER2/neu基因的短髮夾狀siRNA可從轉錄及翻譯水平有效地沉默HER-2/neu基因;HER-2/neu基因沉默的SK-OV-3卵巢癌細胞增殖明顯受抑製.
목적:관찰siRNA표체질립은정전염파향침묵HER2/neu기인대SK-OV-3란소암세포주적영향.방법:침대HER2/neu기인서렬구건단발협상siRNA진핵표체재체(pGenesil-1-HER2/neu),전염란소암세포주SK-OV-3,G418사선출은정전염주후,채용RT-PCR화Western Blot법관찰HER2/neu기인적침묵효과;CCK-8비색분석검측세포체외증식활력;류식세포의검측세포주기.결과:측서증실성공구건HER2/neu적2개단발협상siRNA진핵표체질립;은정전염SK-OV-3세포후,전염료특이성HER-2/neu siRNA적세포HER-2/neu mRNA급p185단백수평균명현저우친본세포급전염무의대조서렬적세포;CCK-8비색분석현시HER-2/neu기인침묵적세포존활분수명현저우HER-2/neu기인고표체적세포(P=0.000);류식세포의세포주기분석야현시,HER-2/neu기인침묵적세포처우조망상태급비증식기적비례명현증가(P균＜0.01),이처우합성기적비례각현저감소(P≤0.001).결론:파향HER2/neu기인적단발협상siRNA가종전록급번역수평유효지침묵HER-2/neu기인;HER-2/neu기인침묵적SK-OV-3란소암세포증식명현수억제.
