畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2008年
6期
746-751
,共6页
郭抗抗%徐浩%张彦明%张为民%冶贵生%熊奎州%谢林红%党如意
郭抗抗%徐浩%張彥明%張為民%冶貴生%熊奎州%謝林紅%黨如意
곽항항%서호%장언명%장위민%야귀생%웅규주%사림홍%당여의
半定量RT-PCR%ELISA%猪瘟病毒%3′-UTR
半定量RT-PCR%ELISA%豬瘟病毒%3′-UTR
반정량RT-PCR%ELISA%저온병독%3′-UTR
对筛选的转录猪瘟病毒石门株3′-UTR shRNA的PK-15细胞株P-1(114～132位)、P-2(136～154位)和P-3(209～227位)分别接种猪瘟病毒(CSFV),在接毒后第72和96小时用半定量反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测CSFV NS3基因及β-actin基因,以研究构建细胞株在转录水平上对CSFV增殖干扰的效果;接毒后第72、96和148小时以酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测细胞NS3蛋白表达量,通过OD490值分析构建细胞株在病毒蛋白表达水平上对CSFV增殖的影响.检测结果表明:(1)接毒后第72和96小时P-1、P-2和P-3细胞株中NS3基因的量明显减少,与接毒的空白PK-15细胞比较差异显著(P<0.05),说明P-1、P-2和P-3细胞株转录的shRNA能干扰CSFV RNA的转录;(2)接毒后第72和96小时P-1、P-2、P-3细胞株中NS3蛋白的表达量明显少于接毒的PK-15细胞(P<0.05),说明转录的shRNA在病毒蛋白水平上能干扰CSFV NS3基因的表达,但接毒后第148小时干扰效果有所降低.
對篩選的轉錄豬瘟病毒石門株3′-UTR shRNA的PK-15細胞株P-1(114～132位)、P-2(136～154位)和P-3(209～227位)分彆接種豬瘟病毒(CSFV),在接毒後第72和96小時用半定量反轉錄-聚閤酶鏈式反應(RT-PCR)檢測CSFV NS3基因及β-actin基因,以研究構建細胞株在轉錄水平上對CSFV增殖榦擾的效果;接毒後第72、96和148小時以酶聯免疫吸附試驗(ELISA)方法檢測細胞NS3蛋白錶達量,通過OD490值分析構建細胞株在病毒蛋白錶達水平上對CSFV增殖的影響.檢測結果錶明:(1)接毒後第72和96小時P-1、P-2和P-3細胞株中NS3基因的量明顯減少,與接毒的空白PK-15細胞比較差異顯著(P<0.05),說明P-1、P-2和P-3細胞株轉錄的shRNA能榦擾CSFV RNA的轉錄;(2)接毒後第72和96小時P-1、P-2、P-3細胞株中NS3蛋白的錶達量明顯少于接毒的PK-15細胞(P<0.05),說明轉錄的shRNA在病毒蛋白水平上能榦擾CSFV NS3基因的錶達,但接毒後第148小時榦擾效果有所降低.
대사선적전록저온병독석문주3′-UTR shRNA적PK-15세포주P-1(114～132위)、P-2(136～154위)화P-3(209～227위)분별접충저온병독(CSFV),재접독후제72화96소시용반정량반전록-취합매련식반응(RT-PCR)검측CSFV NS3기인급β-actin기인,이연구구건세포주재전록수평상대CSFV증식간우적효과;접독후제72、96화148소시이매련면역흡부시험(ELISA)방법검측세포NS3단백표체량,통과OD490치분석구건세포주재병독단백표체수평상대CSFV증식적영향.검측결과표명:(1)접독후제72화96소시P-1、P-2화P-3세포주중NS3기인적량명현감소,여접독적공백PK-15세포비교차이현저(P<0.05),설명P-1、P-2화P-3세포주전록적shRNA능간우CSFV RNA적전록;(2)접독후제72화96소시P-1、P-2、P-3세포주중NS3단백적표체량명현소우접독적PK-15세포(P<0.05),설명전록적shRNA재병독단백수평상능간우CSFV NS3기인적표체,단접독후제148소시간우효과유소강저.
