台湾海峡
檯灣海峽
태만해협
JOURNAL OF OCEANOGRAPHY IN TAIWAN STRAIT
2009年
1期
13-18
,共6页
大黄鱼%β2-微球蛋白%克隆%重组表达%Western-blotting
大黃魚%β2-微毬蛋白%剋隆%重組錶達%Western-blotting
대황어%β2-미구단백%극륭%중조표체%Western-blotting
主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)是一类高度多态的基因群,它广泛分布于各种脊椎动物体内,在启动特异性免疫应答中起关键作用.MHC根据结构分为I型和II型两种.β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2m)是MHCI型分子的轻链.本文根据大黄鱼β2m的表达序列标签(expressed sequence tags, EST)序列设计合成了特异性引物,利用RT-PCR技术从大黄鱼脾脏组织中克隆了β2m基因(Pscr-β2m);构建了含β2m基因的原核表达载体(pGEX4T-2-β2m),在0.1mmol/dm3 IPTG诱导下重组β2m得到了表达;采用Sepharose 4B亲合层析纯化目的蛋白并制备了抗体;Western-blotting分析证实了该抗体具有与天然大黄鱼脾脏组织中β2m蛋白反应的特性.这些结果为进一步研究鱼类β2m 结构与功能的关系,以及制备MHCI类分子四聚体奠定基础.
主要組織相容性複閤體(major histocompatibility complex,MHC)是一類高度多態的基因群,它廣汎分佈于各種脊椎動物體內,在啟動特異性免疫應答中起關鍵作用.MHC根據結構分為I型和II型兩種.β2-微毬蛋白(β2-microglobulin,β2m)是MHCI型分子的輕鏈.本文根據大黃魚β2m的錶達序列標籤(expressed sequence tags, EST)序列設計閤成瞭特異性引物,利用RT-PCR技術從大黃魚脾髒組織中剋隆瞭β2m基因(Pscr-β2m);構建瞭含β2m基因的原覈錶達載體(pGEX4T-2-β2m),在0.1mmol/dm3 IPTG誘導下重組β2m得到瞭錶達;採用Sepharose 4B親閤層析純化目的蛋白併製備瞭抗體;Western-blotting分析證實瞭該抗體具有與天然大黃魚脾髒組織中β2m蛋白反應的特性.這些結果為進一步研究魚類β2m 結構與功能的關繫,以及製備MHCI類分子四聚體奠定基礎.
주요조직상용성복합체(major histocompatibility complex,MHC)시일류고도다태적기인군,타엄범분포우각충척추동물체내,재계동특이성면역응답중기관건작용.MHC근거결구분위I형화II형량충.β2-미구단백(β2-microglobulin,β2m)시MHCI형분자적경련.본문근거대황어β2m적표체서렬표첨(expressed sequence tags, EST)서렬설계합성료특이성인물,이용RT-PCR기술종대황어비장조직중극륭료β2m기인(Pscr-β2m);구건료함β2m기인적원핵표체재체(pGEX4T-2-β2m),재0.1mmol/dm3 IPTG유도하중조β2m득도료표체;채용Sepharose 4B친합층석순화목적단백병제비료항체;Western-blotting분석증실료해항체구유여천연대황어비장조직중β2m단백반응적특성.저사결과위진일보연구어류β2m 결구여공능적관계,이급제비MHCI류분자사취체전정기출.
