农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2010年
3期
573-579
,共7页
王小娥%杨春晓%朱彩霞%孙寅剑%崔金生%肖海君%朱瑞良
王小娥%楊春曉%硃綵霞%孫寅劍%崔金生%肖海君%硃瑞良
왕소아%양춘효%주채하%손인검%최금생%초해군%주서량
模拟表位%噬菌体随机12肽库%噬菌体展示技术
模擬錶位%噬菌體隨機12肽庫%噬菌體展示技術
모의표위%서균체수궤12태고%서균체전시기술
用纯化的4株传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2单克隆抗体(1B5,5D1,2H11和I4-4-3)筛选噬菌体随机12肽库,对40个克隆(10个单克隆噬菌斑×4株单克隆抗体)进行ELISA验证,获得32个阳性克隆,选20个阳性克隆(5个单克隆噬菌斑×4株单克隆抗体)进行DNA序列分析,确定了4个优势12肽为不同传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗原表位.这4个12肽在一级结构上没有3个以上连续氨基酸与GenBank中传染性法氏囊病病毒、VP2的氨基酸序列相同之处,与单抗的结合可被VP2蛋白有效地抑制,推测可能是构象依赖性表位.将4个模拟表位串联表达后获得目的蛋白,经SDS-PAGE分析,目的蛋白占菌体总蛋白的20%,分子量30 kD.用多克隆抗体对目的蛋白进行免疫印迹分析,结果表明目的蛋白具有特异性和反应原性.试验结果提示:筛选的是传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2单抗的模拟表位.
用純化的4株傳染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2單剋隆抗體(1B5,5D1,2H11和I4-4-3)篩選噬菌體隨機12肽庫,對40箇剋隆(10箇單剋隆噬菌斑×4株單剋隆抗體)進行ELISA驗證,穫得32箇暘性剋隆,選20箇暘性剋隆(5箇單剋隆噬菌斑×4株單剋隆抗體)進行DNA序列分析,確定瞭4箇優勢12肽為不同傳染性法氏囊病病毒(IBDV)抗原錶位.這4箇12肽在一級結構上沒有3箇以上連續氨基痠與GenBank中傳染性法氏囊病病毒、VP2的氨基痠序列相同之處,與單抗的結閤可被VP2蛋白有效地抑製,推測可能是構象依賴性錶位.將4箇模擬錶位串聯錶達後穫得目的蛋白,經SDS-PAGE分析,目的蛋白佔菌體總蛋白的20%,分子量30 kD.用多剋隆抗體對目的蛋白進行免疫印跡分析,結果錶明目的蛋白具有特異性和反應原性.試驗結果提示:篩選的是傳染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2單抗的模擬錶位.
용순화적4주전염성법씨낭병병독(IBDV)VP2단극륭항체(1B5,5D1,2H11화I4-4-3)사선서균체수궤12태고,대40개극륭(10개단극륭서균반×4주단극륭항체)진행ELISA험증,획득32개양성극륭,선20개양성극륭(5개단극륭서균반×4주단극륭항체)진행DNA서렬분석,학정료4개우세12태위불동전염성법씨낭병병독(IBDV)항원표위.저4개12태재일급결구상몰유3개이상련속안기산여GenBank중전염성법씨낭병병독、VP2적안기산서렬상동지처,여단항적결합가피VP2단백유효지억제,추측가능시구상의뢰성표위.장4개모의표위천련표체후획득목적단백,경SDS-PAGE분석,목적단백점균체총단백적20%,분자량30 kD.용다극륭항체대목적단백진행면역인적분석,결과표명목적단백구유특이성화반응원성.시험결과제시:사선적시전염성법씨낭병병독(IBDV)VP2단항적모의표위.
