西部医学
西部醫學
서부의학
MEDICAL JOURNAL OF WEST CHINA
2011年
3期
411-414,418
,共5页
曾天才%王卫星%陈先祥%唐俊明%郭凌郧%郑飞%张林菲
曾天纔%王衛星%陳先祥%唐俊明%郭凌鄖%鄭飛%張林菲
증천재%왕위성%진선상%당준명%곽릉운%정비%장림비
血红素加氧酶%PEP-1肽%蛋白转导%肝细胞
血紅素加氧酶%PEP-1肽%蛋白轉導%肝細胞
혈홍소가양매%PEP-1태%단백전도%간세포
目的:采用体外培养的L02肝细胞株,研究PEP-1肤介导血红素加氧酶-1(PEP-1-HO-1)穿透肝细胞的能力.方法:实验分为PEP-1-HO-1组和HO-1组,用基因工程的方法制备并纯化PEP-1-HO-1融合蛋白,将纯化的目的蛋白及HO-1蛋白加入培养的L02肝细胞,通过免疫荧光及western blot来分析其转导能力.结果:经测序分析证实,原核表达质粒pET15b-PEP-1-HO-1重组成功.SDS-PAGE及western blot结果表明,PEP-1-HO-1在Rosetta(DE3)pLysS菌中获得了高效表达,经Ni2+-NTA-树脂柱亲和层析纯化得到了融合蛋白PEP-1-HO-1,将其加入到体外培养的L02肝细胞培养基中,发现它能以剂量依赖及时间依赖的方式转导入细胞内,并能持续稳定表达48h,免疫组化显示其主要分布于胞质和胞核中,结论:PEP-1-HO-1融合蛋白能高效地转导入培养肝细胞,为进一步研究肝细胞氧化应激损伤防治的动物模型实验提供了新的途径.
目的:採用體外培養的L02肝細胞株,研究PEP-1膚介導血紅素加氧酶-1(PEP-1-HO-1)穿透肝細胞的能力.方法:實驗分為PEP-1-HO-1組和HO-1組,用基因工程的方法製備併純化PEP-1-HO-1融閤蛋白,將純化的目的蛋白及HO-1蛋白加入培養的L02肝細胞,通過免疫熒光及western blot來分析其轉導能力.結果:經測序分析證實,原覈錶達質粒pET15b-PEP-1-HO-1重組成功.SDS-PAGE及western blot結果錶明,PEP-1-HO-1在Rosetta(DE3)pLysS菌中穫得瞭高效錶達,經Ni2+-NTA-樹脂柱親和層析純化得到瞭融閤蛋白PEP-1-HO-1,將其加入到體外培養的L02肝細胞培養基中,髮現它能以劑量依賴及時間依賴的方式轉導入細胞內,併能持續穩定錶達48h,免疫組化顯示其主要分佈于胞質和胞覈中,結論:PEP-1-HO-1融閤蛋白能高效地轉導入培養肝細胞,為進一步研究肝細胞氧化應激損傷防治的動物模型實驗提供瞭新的途徑.
목적:채용체외배양적L02간세포주,연구PEP-1부개도혈홍소가양매-1(PEP-1-HO-1)천투간세포적능력.방법:실험분위PEP-1-HO-1조화HO-1조,용기인공정적방법제비병순화PEP-1-HO-1융합단백,장순화적목적단백급HO-1단백가입배양적L02간세포,통과면역형광급western blot래분석기전도능력.결과:경측서분석증실,원핵표체질립pET15b-PEP-1-HO-1중조성공.SDS-PAGE급western blot결과표명,PEP-1-HO-1재Rosetta(DE3)pLysS균중획득료고효표체,경Ni2+-NTA-수지주친화층석순화득도료융합단백PEP-1-HO-1,장기가입도체외배양적L02간세포배양기중,발현타능이제량의뢰급시간의뢰적방식전도입세포내,병능지속은정표체48h,면역조화현시기주요분포우포질화포핵중,결론:PEP-1-HO-1융합단백능고효지전도입배양간세포,위진일보연구간세포양화응격손상방치적동물모형실험제공료신적도경.
