CAJ | 학술논문

目的:应用小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)乳腺癌MDA-MB-231细胞中真核细胞翻译起始因子4E' (eukaryotic translation initiation factor 4E,EIF4E)基因的表达,探讨其对乳腺癌细胞增殖和生长周期的影响.方法:构建针对EIF4E基因的siRNA表达质粒,采用脂质体法将表达质粒pGPU6/GFP/Neo-EIF4E转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞;分别采用RT-PCR,Western印迹法和免疫细胞化学法检测转染EIF4E siRNA后,对MDA-MB-231细胞中EIF4E及cyclinD1 mRNA和蛋白的表达水平的影响;MTT法、平板克隆形成实验和FCM检测MDA-MB-231细胞增殖活性、克隆形成率及细胞周期.结果:成功构建EIF4E siRNA表达质粒.RT-PCR,Western印迹法和免疫细胞化学法检测结果显示,MDA-MB-231细胞中EIF4E及cyclinD1 mRNA和蛋白表达均明显下降(P<0.05).转染EIF4EsiRNA组细胞生长缓慢,集落形成数明显减少,与空白对照组和转染空载体组比较,差异有统计学意义(P<0.05).FCM检测结果显示,EIF4E siRNA转染组G,期细胞所占百分比为(71.30±0.47)%,较空白对照组的(53.10±0.43)%明显增加,而S期细胞所占百分比为(12.53±0.13) %,较空白对照组的(26.47±0.38) %明显减少(P<0.05).结论:EIF4E siRNA可显著下调EIF4E基因在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达水平,在一定程度上抑制乳腺癌细胞的增殖,有可能成为临床治疗乳腺癌的靶点之一.
목적:응용소간우RNA (small interfering RNA,siRNA)유선암MDA-MB-231세포중진핵세포번역기시인자4E' (eukaryotic translation initiation factor 4E,EIF4E)기인적표체,탐토기대유선암세포증식화생장주기적영향.방법:구건침대EIF4E기인적siRNA표체질립,채용지질체법장표체질립pGPU6/GFP/Neo-EIF4E전염인유선암MDA-MB-231세포;분별채용RT-PCR,Western인적법화면역세포화학법검측전염EIF4E siRNA후,대MDA-MB-231세포중EIF4E급cyclinD1 mRNA화단백적표체수평적영향;MTT법、평판극륭형성실험화FCM검측MDA-MB-231세포증식활성、극륭형성솔급세포주기.결과:성공구건EIF4E siRNA표체질립.RT-PCR,Western인적법화면역세포화학법검측결과현시,MDA-MB-231세포중EIF4E급cyclinD1 mRNA화단백표체균명현하강(P<0.05).전염EIF4EsiRNA조세포생장완만,집락형성수명현감소,여공백대조조화전염공재체조비교,차이유통계학의의(P<0.05).FCM검측결과현시,EIF4E siRNA전염조G,기세포소점백분비위(71.30±0.47)%,교공백대조조적(53.10±0.43)%명현증가,이S기세포소점백분비위(12.53±0.13) %,교공백대조조적(26.47±0.38) %명현감소(P<0.05).결론:EIF4E siRNA가현저하조EIF4E기인재유선암MDA-MB-231세포중적표체수평,재일정정도상억제유선암세포적증식,유가능성위림상치료유선암적파점지일.