临床输血与检验
臨床輸血與檢驗
림상수혈여검험
JOURNAL OF CLINICAL TRANSFUSION AND LABORATORY MEDICINE
2004年
1期
12-15
,共4页
卢爱薇%兰风华%程烽%郑德柱%谢飞%朱忠勇
盧愛薇%蘭風華%程烽%鄭德柱%謝飛%硃忠勇
로애미%란풍화%정봉%정덕주%사비%주충용
蛋白S%分子克隆%表达
蛋白S%分子剋隆%錶達
단백S%분자극륭%표체
目的构建人血浆蛋白S的原核表达载体并诱导其表达.方法自行设计引物,采用PCR法,以现有人血浆蛋白S真核表达载体为模板,扩增人血浆蛋白S成熟肽的编码序列.PCR产物经EcoRI和BamHI双酶切后,克隆至GST融合表达载体pGEX-2T中,在E.coli BL21中诱导GST-人血浆蛋白S融合蛋白的表达.结果对重组质粒的序列分析表明,插入片段的序列与Gen Bank登录的人血浆蛋白S基因编码序列完全一致.10%SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,在IPTG的诱导下,BL21重组菌高效表达分子量约为96 kD的产物,并可通过GST亲和层析柱纯化.结论人血浆蛋白S编码序列已被克隆至GST融合表达载体pGEX-2T,并在E.coli BL21中获得表达.
目的構建人血漿蛋白S的原覈錶達載體併誘導其錶達.方法自行設計引物,採用PCR法,以現有人血漿蛋白S真覈錶達載體為模闆,擴增人血漿蛋白S成熟肽的編碼序列.PCR產物經EcoRI和BamHI雙酶切後,剋隆至GST融閤錶達載體pGEX-2T中,在E.coli BL21中誘導GST-人血漿蛋白S融閤蛋白的錶達.結果對重組質粒的序列分析錶明,插入片段的序列與Gen Bank登錄的人血漿蛋白S基因編碼序列完全一緻.10%SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳顯示,在IPTG的誘導下,BL21重組菌高效錶達分子量約為96 kD的產物,併可通過GST親和層析柱純化.結論人血漿蛋白S編碼序列已被剋隆至GST融閤錶達載體pGEX-2T,併在E.coli BL21中穫得錶達.
목적구건인혈장단백S적원핵표체재체병유도기표체.방법자행설계인물,채용PCR법,이현유인혈장단백S진핵표체재체위모판,확증인혈장단백S성숙태적편마서렬.PCR산물경EcoRI화BamHI쌍매절후,극륭지GST융합표체재체pGEX-2T중,재E.coli BL21중유도GST-인혈장단백S융합단백적표체.결과대중조질립적서렬분석표명,삽입편단적서렬여Gen Bank등록적인혈장단백S기인편마서렬완전일치.10%SDS취병희선알응효전영현시,재IPTG적유도하,BL21중조균고효표체분자량약위96 kD적산물,병가통과GST친화층석주순화.결론인혈장단백S편마서렬이피극륭지GST융합표체재체pGEX-2T,병재E.coli BL21중획득표체.
