第一军医大学学报
第一軍醫大學學報
제일군의대학학보
JOURNAL OF FIRST MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2004年
5期
521-524
,共4页
孙来保%李成荣%文剑明%王国兵%张萌%杨军%李若馨
孫來保%李成榮%文劍明%王國兵%張萌%楊軍%李若馨
손래보%리성영%문검명%왕국병%장맹%양군%리약형
反义hTERT%白血病%实时荧光定量RT-PCR%细胞增殖%分子生物学治疗
反義hTERT%白血病%實時熒光定量RT-PCR%細胞增殖%分子生物學治療
반의hTERT%백혈병%실시형광정량RT-PCR%세포증식%분자생물학치료
目的研究反义hTERT基因对白血病细胞体外增殖的抑制作用.方法体外通过SuperFect将已构建好的正、反义hTERT真核表达载体转染HL60白血病细胞,再经过G418及PCR筛选鉴定分别转入了正、反义hTERT载体的抗性克隆细胞HL60-s和HL60-as.随后运用实时荧光定量RT-PCR技术及TRAP-银染法对各组细胞内源性hTERTmRNA的表达情况及端粒酶的活性进行检测.同时还采用MTT法、双层软琼脂克隆形成试验、流式细胞术观察和分析反义hTERT对白血病细胞体外生长增殖活力的影响及是否能诱导瘤细胞的凋亡.结果与空白对照、正义hTERT组相比,反义hTERT能显著地降低HL60细胞内源性hTERT mRNA的表达(P＜0.01)和下词端粒酶活性.当各组细胞传至第25代后,与HL60、HL60-s比较,HL60-as细胞的生长速度和集落形成能力明显地减慢和降低,同时伴有凋亡率的显著增加.结论反义hTERT在体外能抑制白血病细胞的生长增殖能力,其潜在、广谱的抗肿瘤作用的分子生物学机制可能是首先通过抑制和下调hTERT表达(端粒酶活性)而最终引发瘤细胞衰亡的途径来实现的.
目的研究反義hTERT基因對白血病細胞體外增殖的抑製作用.方法體外通過SuperFect將已構建好的正、反義hTERT真覈錶達載體轉染HL60白血病細胞,再經過G418及PCR篩選鑒定分彆轉入瞭正、反義hTERT載體的抗性剋隆細胞HL60-s和HL60-as.隨後運用實時熒光定量RT-PCR技術及TRAP-銀染法對各組細胞內源性hTERTmRNA的錶達情況及耑粒酶的活性進行檢測.同時還採用MTT法、雙層軟瓊脂剋隆形成試驗、流式細胞術觀察和分析反義hTERT對白血病細胞體外生長增殖活力的影響及是否能誘導瘤細胞的凋亡.結果與空白對照、正義hTERT組相比,反義hTERT能顯著地降低HL60細胞內源性hTERT mRNA的錶達(P＜0.01)和下詞耑粒酶活性.噹各組細胞傳至第25代後,與HL60、HL60-s比較,HL60-as細胞的生長速度和集落形成能力明顯地減慢和降低,同時伴有凋亡率的顯著增加.結論反義hTERT在體外能抑製白血病細胞的生長增殖能力,其潛在、廣譜的抗腫瘤作用的分子生物學機製可能是首先通過抑製和下調hTERT錶達(耑粒酶活性)而最終引髮瘤細胞衰亡的途徑來實現的.
목적연구반의hTERT기인대백혈병세포체외증식적억제작용.방법체외통과SuperFect장이구건호적정、반의hTERT진핵표체재체전염HL60백혈병세포,재경과G418급PCR사선감정분별전입료정、반의hTERT재체적항성극륭세포HL60-s화HL60-as.수후운용실시형광정량RT-PCR기술급TRAP-은염법대각조세포내원성hTERTmRNA적표체정황급단립매적활성진행검측.동시환채용MTT법、쌍층연경지극륭형성시험、류식세포술관찰화분석반의hTERT대백혈병세포체외생장증식활력적영향급시부능유도류세포적조망.결과여공백대조、정의hTERT조상비,반의hTERT능현저지강저HL60세포내원성hTERT mRNA적표체(P＜0.01)화하사단립매활성.당각조세포전지제25대후,여HL60、HL60-s비교,HL60-as세포적생장속도화집락형성능력명현지감만화강저,동시반유조망솔적현저증가.결론반의hTERT재체외능억제백혈병세포적생장증식능력,기잠재、엄보적항종류작용적분자생물학궤제가능시수선통과억제화하조hTERT표체(단립매활성)이최종인발류세포쇠망적도경래실현적.
