细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2007年
1期
75-76
,共2页
靳迪%饶恩于%李景鹏%赵勇
靳迪%饒恩于%李景鵬%趙勇
근적%요은우%리경붕%조용
小鼠OCILrP2%原核表达%抗OCILrP2抗血清
小鼠OCILrP2%原覈錶達%抗OCILrP2抗血清
소서OCILrP2%원핵표체%항OCILrP2항혈청
目的:在原核系统中表达破骨细胞抑制凝集素家族成员之一OCILrP2基因, 并制备大鼠抗OCILrP2的抗血清.方法:应用RT-PCR从小鼠脾细胞中克隆的部分OCILrP2 cDNA, 构建重组表达载体pET-28a-OCILrP2, 并转化大肠杆菌BL21(DE3), 以IPTG诱导表达His-OCILrP2融合蛋白.以表达产物免疫SD大鼠, 制备大鼠抗OCILrP2的抗血清.采用Western blot测定其效价和特异性.结果:RT-PCR法扩增出235 bp的OCILrP2基因, 其cDNA序列与GenBank中登录的序列一致.以构建的重组质粒pET-28a-OCILrP2转化大肠杆菌获得目的蛋白的高表达.以表达的His-OCILrP2融合蛋白免疫大鼠获得抗小鼠OCILrP2的抗血清.Western blot分析表明, 该抗血清均可与原核表达的His-OCILrP2融合蛋白和真核表达的OCILrP2-Ig融合蛋白特异性结合;抗血清的效价为1:2 000.结论:在原核细胞中表达了小鼠的OCILrP2蛋白, 制备了大鼠抗小鼠OCILrP2的抗血清, 为进一步研究OCILrP2的生物学功能奠定了基础.
目的:在原覈繫統中錶達破骨細胞抑製凝集素傢族成員之一OCILrP2基因, 併製備大鼠抗OCILrP2的抗血清.方法:應用RT-PCR從小鼠脾細胞中剋隆的部分OCILrP2 cDNA, 構建重組錶達載體pET-28a-OCILrP2, 併轉化大腸桿菌BL21(DE3), 以IPTG誘導錶達His-OCILrP2融閤蛋白.以錶達產物免疫SD大鼠, 製備大鼠抗OCILrP2的抗血清.採用Western blot測定其效價和特異性.結果:RT-PCR法擴增齣235 bp的OCILrP2基因, 其cDNA序列與GenBank中登錄的序列一緻.以構建的重組質粒pET-28a-OCILrP2轉化大腸桿菌穫得目的蛋白的高錶達.以錶達的His-OCILrP2融閤蛋白免疫大鼠穫得抗小鼠OCILrP2的抗血清.Western blot分析錶明, 該抗血清均可與原覈錶達的His-OCILrP2融閤蛋白和真覈錶達的OCILrP2-Ig融閤蛋白特異性結閤;抗血清的效價為1:2 000.結論:在原覈細胞中錶達瞭小鼠的OCILrP2蛋白, 製備瞭大鼠抗小鼠OCILrP2的抗血清, 為進一步研究OCILrP2的生物學功能奠定瞭基礎.
목적:재원핵계통중표체파골세포억제응집소가족성원지일OCILrP2기인, 병제비대서항OCILrP2적항혈청.방법:응용RT-PCR종소서비세포중극륭적부분OCILrP2 cDNA, 구건중조표체재체pET-28a-OCILrP2, 병전화대장간균BL21(DE3), 이IPTG유도표체His-OCILrP2융합단백.이표체산물면역SD대서, 제비대서항OCILrP2적항혈청.채용Western blot측정기효개화특이성.결과:RT-PCR법확증출235 bp적OCILrP2기인, 기cDNA서렬여GenBank중등록적서렬일치.이구건적중조질립pET-28a-OCILrP2전화대장간균획득목적단백적고표체.이표체적His-OCILrP2융합단백면역대서획득항소서OCILrP2적항혈청.Western blot분석표명, 해항혈청균가여원핵표체적His-OCILrP2융합단백화진핵표체적OCILrP2-Ig융합단백특이성결합;항혈청적효개위1:2 000.결론:재원핵세포중표체료소서적OCILrP2단백, 제비료대서항소서OCILrP2적항혈청, 위진일보연구OCILrP2적생물학공능전정료기출.
