CAJ | 학술논문

目的:将血管内皮生长因子应用于骨髓单个核细胞自体移植治疗肢体缺血,探索一种简单、安全有效治疗肢体缺血的方法,同时初步分析血管内皮生长因子促进血管新生的机制和疗效.方法:实验于2005-03/2006-07在上海交通大学附属第六人民医院动物实验中心完成.将48只雄性Wistar大鼠采用随机单位组设计分为4组:缺血对照组、血管内皮生长因子治疗组、骨髓单个核细胞治疗组、转染血管内皮生长因子基因的骨髓单个核细胞治疗组,每组12只.结扎所有动物左后肢股动脉及分支,制备后肢缺血模型.以微量加样器自结扎处以下2 cm开始,间隔0.2 cm为一注射点,共注射于内收肌和腓肠肌5点,每注射点各注射60 μL,缺血对照组大鼠注射300 μL培养液,血管内皮生长因子治疗组大鼠注射含5 pg基因pcDNA3.1-hVEGF165的DNA-脂质体复合物,骨髓单个核细胞治疗组大鼠注射3×106个骨髓单个核细胞,转染血管内皮生长因子基因的骨髓单个核细胞治疗组大鼠注射含3×106个血管内皮生长因子的骨髓单个核细胞.于移植后4周行动脉造影,采用RT-PCR检测血管内皮生长因子基因的体内表达,采用免疫组化法检测缺血区新生血管密度,评价血管新生情况.结果:48只大鼠均造模成功,并进入结果分析.①移植后4周动脉造影显示,缺血对照组大鼠股动脉及其分支均未显影,血管内皮生长因子治疗组和骨髓单个核细胞治疗组可见中等量新生血管,两组效果相似,转染血管内皮生长因子基因的骨髓单个核细胞治疗组可见有大量新生血管新生,丰富的侧枝循环建立.②大鼠毛细血管密度测定结果显示,血管内皮生长因子治疗组和骨髓单个核细胞治疗组均较缺血对照组新生血管数量增加,转染血管内皮生长因子基因的骨髓单个核细胞治疗组可进一步增强疗效[(10.0±0.8),(21.7±1.9),(20.4±3.3),(42.1±3.5)个/HP,P＜0.05],血管内皮生长因子治疗组和骨髓单个核细胞治疗组两组之间差异无明显统计学意义(P＞0.05).③RT-PCR检测大鼠血管内皮生长因子基因的体内表达,转染血管内皮生长因子基因的骨髓单个核细胞治疗组和血管内皮生长因子治疗组均有扩增,转染血管内皮生长因子基因的骨髓单个核细胞治疗组人血管内皮生长因子mRNA相对含量表达高于血管内皮生长因子治疗组(0.191±0.044,0.094±0.032,P＜0.05).结论:本组实验结果说明采用骨髓单个核细胞作为基因载体细胞治疗大鼠肢体缺血,能使血管内皮生长因子获得稳定有效的表达,其效果优于直接基因注射. 目的:將血管內皮生長因子應用于骨髓單箇覈細胞自體移植治療肢體缺血,探索一種簡單、安全有效治療肢體缺血的方法,同時初步分析血管內皮生長因子促進血管新生的機製和療效.方法:實驗于2005-03/2006-07在上海交通大學附屬第六人民醫院動物實驗中心完成.將48隻雄性Wistar大鼠採用隨機單位組設計分為4組:缺血對照組、血管內皮生長因子治療組、骨髓單箇覈細胞治療組、轉染血管內皮生長因子基因的骨髓單箇覈細胞治療組,每組12隻.結扎所有動物左後肢股動脈及分支,製備後肢缺血模型.以微量加樣器自結扎處以下2 cm開始,間隔0.2 cm為一註射點,共註射于內收肌和腓腸肌5點,每註射點各註射60 μL,缺血對照組大鼠註射300 μL培養液,血管內皮生長因子治療組大鼠註射含5 pg基因pcDNA3.1-hVEGF165的DNA-脂質體複閤物,骨髓單箇覈細胞治療組大鼠註射3×106箇骨髓單箇覈細胞,轉染血管內皮生長因子基因的骨髓單箇覈細胞治療組大鼠註射含3×106箇血管內皮生長因子的骨髓單箇覈細胞.于移植後4週行動脈造影,採用RT-PCR檢測血管內皮生長因子基因的體內錶達,採用免疫組化法檢測缺血區新生血管密度,評價血管新生情況.結果:48隻大鼠均造模成功,併進入結果分析.①移植後4週動脈造影顯示,缺血對照組大鼠股動脈及其分支均未顯影,血管內皮生長因子治療組和骨髓單箇覈細胞治療組可見中等量新生血管,兩組效果相似,轉染血管內皮生長因子基因的骨髓單箇覈細胞治療組可見有大量新生血管新生,豐富的側枝循環建立.②大鼠毛細血管密度測定結果顯示,血管內皮生長因子治療組和骨髓單箇覈細胞治療組均較缺血對照組新生血管數量增加,轉染血管內皮生長因子基因的骨髓單箇覈細胞治療組可進一步增彊療效[(10.0±0.8),(21.7±1.9),(20.4±3.3),(42.1±3.5)箇/HP,P＜0.05],血管內皮生長因子治療組和骨髓單箇覈細胞治療組兩組之間差異無明顯統計學意義(P＞0.05).③RT-PCR檢測大鼠血管內皮生長因子基因的體內錶達,轉染血管內皮生長因子基因的骨髓單箇覈細胞治療組和血管內皮生長因子治療組均有擴增,轉染血管內皮生長因子基因的骨髓單箇覈細胞治療組人血管內皮生長因子mRNA相對含量錶達高于血管內皮生長因子治療組(0.191±0.044,0.094±0.032,P＜0.05).結論:本組實驗結果說明採用骨髓單箇覈細胞作為基因載體細胞治療大鼠肢體缺血,能使血管內皮生長因子穫得穩定有效的錶達,其效果優于直接基因註射.
목적:장혈관내피생장인자응용우골수단개핵세포자체이식치료지체결혈,탐색일충간단、안전유효치료지체결혈적방법,동시초보분석혈관내피생장인자촉진혈관신생적궤제화료효.방법:실험우2005-03/2006-07재상해교통대학부속제륙인민의원동물실험중심완성.장48지웅성Wistar대서채용수궤단위조설계분위4조:결혈대조조、혈관내피생장인자치료조、골수단개핵세포치료조、전염혈관내피생장인자기인적골수단개핵세포치료조,매조12지.결찰소유동물좌후지고동맥급분지,제비후지결혈모형.이미량가양기자결찰처이하2 cm개시,간격0.2 cm위일주사점,공주사우내수기화비장기5점,매주사점각주사60 μL,결혈대조조대서주사300 μL배양액,혈관내피생장인자치료조대서주사함5 pg기인pcDNA3.1-hVEGF165적DNA-지질체복합물,골수단개핵세포치료조대서주사3×106개골수단개핵세포,전염혈관내피생장인자기인적골수단개핵세포치료조대서주사함3×106개혈관내피생장인자적골수단개핵세포.우이식후4주행동맥조영,채용RT-PCR검측혈관내피생장인자기인적체내표체,채용면역조화법검측결혈구신생혈관밀도,평개혈관신생정황.결과:48지대서균조모성공,병진입결과분석.①이식후4주동맥조영현시,결혈대조조대서고동맥급기분지균미현영,혈관내피생장인자치료조화골수단개핵세포치료조가견중등량신생혈관,량조효과상사,전염혈관내피생장인자기인적골수단개핵세포치료조가견유대량신생혈관신생,봉부적측지순배건립.②대서모세혈관밀도측정결과현시,혈관내피생장인자치료조화골수단개핵세포치료조균교결혈대조조신생혈관수량증가,전염혈관내피생장인자기인적골수단개핵세포치료조가진일보증강료효[(10.0±0.8),(21.7±1.9),(20.4±3.3),(42.1±3.5)개/HP,P＜0.05],혈관내피생장인자치료조화골수단개핵세포치료조량조지간차이무명현통계학의의(P＞0.05).③RT-PCR검측대서혈관내피생장인자기인적체내표체,전염혈관내피생장인자기인적골수단개핵세포치료조화혈관내피생장인자치료조균유확증,전염혈관내피생장인자기인적골수단개핵세포치료조인혈관내피생장인자mRNA상대함량표체고우혈관내피생장인자치료조(0.191±0.044,0.094±0.032,P＜0.05).결론:본조실험결과설명채용골수단개핵세포작위기인재체세포치료대서지체결혈,능사혈관내피생장인자획득은정유효적표체,기효과우우직접기인주사.