生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2007年
6期
939-941
,共3页
胡思顺%李自力%肖运才%刘梅%毕丁仁%许青荣
鬍思順%李自力%肖運纔%劉梅%畢丁仁%許青榮
호사순%리자력%초운재%류매%필정인%허청영
禽流感病毒%核蛋白%融合表达%多克隆抗体
禽流感病毒%覈蛋白%融閤錶達%多剋隆抗體
금류감병독%핵단백%융합표체%다극륭항체
目的:利用大肠杆菌表达H9N2禽流感病毒(AIV)核蛋白(NP)与GST的融合蛋白并分离纯化,进行动物免疫制备多克隆抗体.方法:根据AIV NP基因序列设计引物,将已经获得的NP基因定向克隆到GST融合原核表达载体pGEX-KG并转化大肠杆菌,在IPTG诱导下获得高效表达.经谷胱甘肽层析柱分离纯化蛋白,制备抗原免疫家兔,得到pGEX-KG-NP多克隆抗体.结果:SDS-PAGE分析显示融合表达蛋白GST-NP相对分子质量约82 000,表达量约占菌体总蛋白的20%.Western-blot和ELISA检测结果表明,重组NP能与鸡抗AIV抗体发生明显的抗原抗体反应.自制的多克隆抗体能特异地与NP相互作用,可用于AIV病原诊断.结论:获得了NP基因的高效表达产物;制备了效价和特异性良好的抗重组NP多克隆抗体.经实验验证表达产物具有活性,多克隆抗体效价高,特异性强,为AIV病原诊断试剂的研发奠定了基础.
目的:利用大腸桿菌錶達H9N2禽流感病毒(AIV)覈蛋白(NP)與GST的融閤蛋白併分離純化,進行動物免疫製備多剋隆抗體.方法:根據AIV NP基因序列設計引物,將已經穫得的NP基因定嚮剋隆到GST融閤原覈錶達載體pGEX-KG併轉化大腸桿菌,在IPTG誘導下穫得高效錶達.經穀胱甘肽層析柱分離純化蛋白,製備抗原免疫傢兔,得到pGEX-KG-NP多剋隆抗體.結果:SDS-PAGE分析顯示融閤錶達蛋白GST-NP相對分子質量約82 000,錶達量約佔菌體總蛋白的20%.Western-blot和ELISA檢測結果錶明,重組NP能與鷄抗AIV抗體髮生明顯的抗原抗體反應.自製的多剋隆抗體能特異地與NP相互作用,可用于AIV病原診斷.結論:穫得瞭NP基因的高效錶達產物;製備瞭效價和特異性良好的抗重組NP多剋隆抗體.經實驗驗證錶達產物具有活性,多剋隆抗體效價高,特異性彊,為AIV病原診斷試劑的研髮奠定瞭基礎.
목적:이용대장간균표체H9N2금류감병독(AIV)핵단백(NP)여GST적융합단백병분리순화,진행동물면역제비다극륭항체.방법:근거AIV NP기인서렬설계인물,장이경획득적NP기인정향극륭도GST융합원핵표체재체pGEX-KG병전화대장간균,재IPTG유도하획득고효표체.경곡광감태층석주분리순화단백,제비항원면역가토,득도pGEX-KG-NP다극륭항체.결과:SDS-PAGE분석현시융합표체단백GST-NP상대분자질량약82 000,표체량약점균체총단백적20%.Western-blot화ELISA검측결과표명,중조NP능여계항AIV항체발생명현적항원항체반응.자제적다극륭항체능특이지여NP상호작용,가용우AIV병원진단.결론:획득료NP기인적고효표체산물;제비료효개화특이성량호적항중조NP다극륭항체.경실험험증표체산물구유활성,다극륭항체효개고,특이성강,위AIV병원진단시제적연발전정료기출.
