华南国防医学杂志
華南國防醫學雜誌
화남국방의학잡지
MILLITARY MEDICAL JOURNAL OF SOUTH CHINA
2008年
4期
30-32,45
,共4页
γ干扰素诱导蛋白10%融合蛋白%细胞迁移
γ榦擾素誘導蛋白10%融閤蛋白%細胞遷移
γ간우소유도단백10%융합단백%세포천이
目的 构建人His标记的γ干扰素诱导蛋白10 (interferon-γ-inducible protein 10, IP-10)融合蛋白表达载体并在原核细胞中表达、纯化,获得有活性的IP-10蛋白,为进一步研究其在炎症过程中的作用机制及寻找新的抗炎途径提供基础.方法 从人肺cDNA文库中PCR扩增无信号肽的IP-10基因编码序列,构建重组载体pET-14b/IP-10;重组质粒经酶切、测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株;经异丙基γ-D-硫代半乳糖(IPTG)诱导后,用镍离子亲和层析柱纯化融合蛋白,以THP-1细胞进行微室跨膜迁移(transwell)实验鉴定融合蛋白活性.结果 酶切、测序鉴定重组载体pET-14b/IP-10构建正确,并纯化得到高纯度的IP-10融合蛋白.而且该蛋白具有诱导单核细胞THP-1跨膜迁移活性.结论 成功构建了人IP-10融合蛋白表达载体,并纯化得到具有活性的IP-10融合蛋白,为进一步研究IP-10的功能提供了重要的实验材料.
目的 構建人His標記的γ榦擾素誘導蛋白10 (interferon-γ-inducible protein 10, IP-10)融閤蛋白錶達載體併在原覈細胞中錶達、純化,穫得有活性的IP-10蛋白,為進一步研究其在炎癥過程中的作用機製及尋找新的抗炎途徑提供基礎.方法 從人肺cDNA文庫中PCR擴增無信號肽的IP-10基因編碼序列,構建重組載體pET-14b/IP-10;重組質粒經酶切、測序鑒定正確後轉化大腸桿菌BL21(DE3)菌株;經異丙基γ-D-硫代半乳糖(IPTG)誘導後,用鎳離子親和層析柱純化融閤蛋白,以THP-1細胞進行微室跨膜遷移(transwell)實驗鑒定融閤蛋白活性.結果 酶切、測序鑒定重組載體pET-14b/IP-10構建正確,併純化得到高純度的IP-10融閤蛋白.而且該蛋白具有誘導單覈細胞THP-1跨膜遷移活性.結論 成功構建瞭人IP-10融閤蛋白錶達載體,併純化得到具有活性的IP-10融閤蛋白,為進一步研究IP-10的功能提供瞭重要的實驗材料.
목적 구건인His표기적γ간우소유도단백10 (interferon-γ-inducible protein 10, IP-10)융합단백표체재체병재원핵세포중표체、순화,획득유활성적IP-10단백,위진일보연구기재염증과정중적작용궤제급심조신적항염도경제공기출.방법 종인폐cDNA문고중PCR확증무신호태적IP-10기인편마서렬,구건중조재체pET-14b/IP-10;중조질립경매절、측서감정정학후전화대장간균BL21(DE3)균주;경이병기γ-D-류대반유당(IPTG)유도후,용얼리자친화층석주순화융합단백,이THP-1세포진행미실과막천이(transwell)실험감정융합단백활성.결과 매절、측서감정중조재체pET-14b/IP-10구건정학,병순화득도고순도적IP-10융합단백.이차해단백구유유도단핵세포THP-1과막천이활성.결론 성공구건료인IP-10융합단백표체재체,병순화득도구유활성적IP-10융합단백,위진일보연구IP-10적공능제공료중요적실험재료.
