国际眼科杂志
國際眼科雜誌
국제안과잡지
INTERNATIONAL JOURNAL OF OPHTHALMOLOGY
2008年
12期
2431-2434
,共4页
许志洋%姚家奇%刘庆淮%李建民%王强
許誌洋%姚傢奇%劉慶淮%李建民%王彊
허지양%요가기%류경회%리건민%왕강
SYBR Green%实时荧光PCR%17-AAG%视网膜色素上皮细胞%增生性玻璃体视网膜病变%热休克蛋白90
SYBR Green%實時熒光PCR%17-AAG%視網膜色素上皮細胞%增生性玻璃體視網膜病變%熱休剋蛋白90
SYBR Green%실시형광PCR%17-AAG%시망막색소상피세포%증생성파리체시망막병변%열휴극단백90
目的:通过检测17-AAG对人RPE细胞不同处理条件下mRNA的SYBR Green实时PCR方法,观察17-AAG对人RPE细胞中PDGFR和EGFR基因表达的调控.方法:体外培养人RPE细胞株.当加入17-AAG并作用0,2,5,10μmol/L及0,16,24,48h后,收集细胞,抽提RNA进行反转录.同时根据PDGFR、EGFR的基因序列,设计PDGFR、EGFR的引物,利用ABI 7300PCR仪和SYBRGreen,建立实时荧光PCR反应条件,通过比较Ct值进行基因表达的相对定量分析.结果:熔解曲线分析和琼脂糖凝胶电泳结果证明了PCR反应的特异性;相对定量结果显示,17-AAG可以下调PDGFR基因的表达(P<0.05),上调EGFR基因表达(P<0.05).结论:SYBR Green实时荧光PCR可特异、准确地分析RPE细胞相关增殖基因表达差异,为系统研究17-AAG治疗PVR的复杂调控机制创造有力条件.
目的:通過檢測17-AAG對人RPE細胞不同處理條件下mRNA的SYBR Green實時PCR方法,觀察17-AAG對人RPE細胞中PDGFR和EGFR基因錶達的調控.方法:體外培養人RPE細胞株.噹加入17-AAG併作用0,2,5,10μmol/L及0,16,24,48h後,收集細胞,抽提RNA進行反轉錄.同時根據PDGFR、EGFR的基因序列,設計PDGFR、EGFR的引物,利用ABI 7300PCR儀和SYBRGreen,建立實時熒光PCR反應條件,通過比較Ct值進行基因錶達的相對定量分析.結果:鎔解麯線分析和瓊脂糖凝膠電泳結果證明瞭PCR反應的特異性;相對定量結果顯示,17-AAG可以下調PDGFR基因的錶達(P<0.05),上調EGFR基因錶達(P<0.05).結論:SYBR Green實時熒光PCR可特異、準確地分析RPE細胞相關增殖基因錶達差異,為繫統研究17-AAG治療PVR的複雜調控機製創造有力條件.
목적:통과검측17-AAG대인RPE세포불동처리조건하mRNA적SYBR Green실시PCR방법,관찰17-AAG대인RPE세포중PDGFR화EGFR기인표체적조공.방법:체외배양인RPE세포주.당가입17-AAG병작용0,2,5,10μmol/L급0,16,24,48h후,수집세포,추제RNA진행반전록.동시근거PDGFR、EGFR적기인서렬,설계PDGFR、EGFR적인물,이용ABI 7300PCR의화SYBRGreen,건립실시형광PCR반응조건,통과비교Ct치진행기인표체적상대정량분석.결과:용해곡선분석화경지당응효전영결과증명료PCR반응적특이성;상대정량결과현시,17-AAG가이하조PDGFR기인적표체(P<0.05),상조EGFR기인표체(P<0.05).결론:SYBR Green실시형광PCR가특이、준학지분석RPE세포상관증식기인표체차이,위계통연구17-AAG치료PVR적복잡조공궤제창조유력조건.
