生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2009年
6期
696-701
,共6页
张剑%韩雅玲%康建%张效林%齐岩梅%闫承慧%李少华
張劍%韓雅玲%康建%張效林%齊巖梅%閆承慧%李少華
장검%한아령%강건%장효림%제암매%염승혜%리소화
胚胎干细胞%Rac1%分化%血管发育
胚胎榦細胞%Rac1%分化%血管髮育
배태간세포%Rac1%분화%혈관발육
小G蛋白Rac1在胚胎发育早期血管形成尤其是内皮发生过程中的作用尚不清楚.采用胚胎干细胞(ESCs)为模型,建立稳定表达持续表达型Rac1(G12V)和显性失活型Rac1(T17N)编码序列的小鼠ESCs并制备胚胎小体(EBs),诱导分化后观察Rac1(G12V)和Rac1(T17N)对内皮细胞分化和迁移功能的影响.采用相差显微镜观察EBs发育和分化特征,Pull down分析Racl表达变化,免疫荧光染色和Western blot分析内皮分化标志物,Matrigel凝胶实验观察血管索形成.结果表明,无论过表达或抑制Rac1的活化,并不影响EBs发育,均可形成典型的EBs胚层结构.抑制Rac1活化对内皮细胞系的发育无影响,但分化的内皮细胞不能连接成血管网.活化的Rac1表达减少,细胞迁移受到明显抑制.抑制Rac1活化导致细胞骨架F-actin排布紊乱.以上结果提示,Rac1影响胚胎早期血管发育的凶素是抑制细胞游走,后者可能是通过F-actin机制所介导.
小G蛋白Rac1在胚胎髮育早期血管形成尤其是內皮髮生過程中的作用尚不清楚.採用胚胎榦細胞(ESCs)為模型,建立穩定錶達持續錶達型Rac1(G12V)和顯性失活型Rac1(T17N)編碼序列的小鼠ESCs併製備胚胎小體(EBs),誘導分化後觀察Rac1(G12V)和Rac1(T17N)對內皮細胞分化和遷移功能的影響.採用相差顯微鏡觀察EBs髮育和分化特徵,Pull down分析Racl錶達變化,免疫熒光染色和Western blot分析內皮分化標誌物,Matrigel凝膠實驗觀察血管索形成.結果錶明,無論過錶達或抑製Rac1的活化,併不影響EBs髮育,均可形成典型的EBs胚層結構.抑製Rac1活化對內皮細胞繫的髮育無影響,但分化的內皮細胞不能連接成血管網.活化的Rac1錶達減少,細胞遷移受到明顯抑製.抑製Rac1活化導緻細胞骨架F-actin排佈紊亂.以上結果提示,Rac1影響胚胎早期血管髮育的兇素是抑製細胞遊走,後者可能是通過F-actin機製所介導.
소G단백Rac1재배태발육조기혈관형성우기시내피발생과정중적작용상불청초.채용배태간세포(ESCs)위모형,건립은정표체지속표체형Rac1(G12V)화현성실활형Rac1(T17N)편마서렬적소서ESCs병제비배태소체(EBs),유도분화후관찰Rac1(G12V)화Rac1(T17N)대내피세포분화화천이공능적영향.채용상차현미경관찰EBs발육화분화특정,Pull down분석Racl표체변화,면역형광염색화Western blot분석내피분화표지물,Matrigel응효실험관찰혈관색형성.결과표명,무론과표체혹억제Rac1적활화,병불영향EBs발육,균가형성전형적EBs배층결구.억제Rac1활화대내피세포계적발육무영향,단분화적내피세포불능련접성혈관망.활화적Rac1표체감소,세포천이수도명현억제.억제Rac1활화도치세포골가F-actin배포문란.이상결과제시,Rac1영향배태조기혈관발육적흉소시억제세포유주,후자가능시통과F-actin궤제소개도.
