中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2010年
6期
428-431,454
,共5页
付世新%齐长学%罗春海%张丽%王瑶
付世新%齊長學%囉春海%張麗%王瑤
부세신%제장학%라춘해%장려%왕요
牛乳溶菌酶%毕赤酵母%分泌表达%抗菌活性
牛乳溶菌酶%畢赤酵母%分泌錶達%抗菌活性
우유용균매%필적효모%분비표체%항균활성
为真核表达牛乳溶菌酶,本研究在通过酵母偏爱密码子改造并人工合成LYZ1基因的基础上,将LYZ1基因经克隆构建了高效表达具有生物活性牛乳溶菌酶的分泌型表达载体pPICZα-A-LYZ1,将其经Sac Ⅰ酶切线性化后电转化毕赤酵母菌株GS115中,通过Zeocin筛选和PCR鉴定后的阳性重组菌用甲醇诱导60 h后,进行SDS-PAGE和western blot鉴定,用溶壁微球菌对其进行活性检测,并对其进行体外抑菌效果检测分析.结果表明:分泌表达的重组目的蛋白约16 km,而且抗血清具有良好的反应原性.活性检测表明,培养液中重组溶菌酶活性达到2 842 u/mL.体外抑菌试验结果表明,重组牛乳溶菌酶对标准葡萄球菌及大肠杆菌菌株具有较好的抗菌作用,而对无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌作用较弱.
為真覈錶達牛乳溶菌酶,本研究在通過酵母偏愛密碼子改造併人工閤成LYZ1基因的基礎上,將LYZ1基因經剋隆構建瞭高效錶達具有生物活性牛乳溶菌酶的分泌型錶達載體pPICZα-A-LYZ1,將其經Sac Ⅰ酶切線性化後電轉化畢赤酵母菌株GS115中,通過Zeocin篩選和PCR鑒定後的暘性重組菌用甲醇誘導60 h後,進行SDS-PAGE和western blot鑒定,用溶壁微毬菌對其進行活性檢測,併對其進行體外抑菌效果檢測分析.結果錶明:分泌錶達的重組目的蛋白約16 km,而且抗血清具有良好的反應原性.活性檢測錶明,培養液中重組溶菌酶活性達到2 842 u/mL.體外抑菌試驗結果錶明,重組牛乳溶菌酶對標準葡萄毬菌及大腸桿菌菌株具有較好的抗菌作用,而對無乳鏈毬菌、停乳鏈毬菌、乳房鏈毬菌作用較弱.
위진핵표체우유용균매,본연구재통과효모편애밀마자개조병인공합성LYZ1기인적기출상,장LYZ1기인경극륭구건료고효표체구유생물활성우유용균매적분비형표체재체pPICZα-A-LYZ1,장기경Sac Ⅰ매절선성화후전전화필적효모균주GS115중,통과Zeocin사선화PCR감정후적양성중조균용갑순유도60 h후,진행SDS-PAGE화western blot감정,용용벽미구균대기진행활성검측,병대기진행체외억균효과검측분석.결과표명:분비표체적중조목적단백약16 km,이차항혈청구유량호적반응원성.활성검측표명,배양액중중조용균매활성체도2 842 u/mL.체외억균시험결과표명,중조우유용균매대표준포도구균급대장간균균주구유교호적항균작용,이대무유련구균、정유련구균、유방련구균작용교약.
